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基于单域重链抗体的天然噬菌体文库的构建及抗DON适配体的淘选

缩略语表第1-5页
目录第5-10页
摘要第10-12页
Abstract第12-15页
第一章 文献综述第15-38页
   ·单域重链抗体技术研究进展第15-19页
     ·单域重链抗体技术第15-16页
     ·单域重链抗体技术研究应用现状第16-19页
       ·单域重链抗体辅助绘制蛋白三维结构第16-17页
       ·单域重链抗体用于医学诊断和检测第17-18页
       ·单域重链抗体用于疾病治疗第18页
       ·单域重链抗体在食品领域的应用前景第18-19页
   ·基因工程抗体技术研究进展第19-23页
     ·抗体制备技术第19-20页
     ·抗体库技术第20-23页
       ·抗体库的概念与种类第20页
       ·噬菌体抗体库技术第20-21页
       ·噬菌体抗体库技术研究开发现状第21-23页
   ·基于多肽的适配体及其研究进展第23-26页
     ·基于多肽的适配体第23-24页
     ·基于多肽适配体的应用第24-26页
       ·医学领域第24-25页
       ·食品安全检测第25-26页
       ·分离介质第26页
   ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇分析检测方法研究进展第26-36页
     ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇的理化性质第26-27页
     ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇的毒性第27-28页
     ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇的污染状况及其检测限量标准第28-31页
     ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇的分析第31-36页
       ·DON提取与净化技术第31-32页
       ·色谱法第32-33页
       ·酶联免疫吸附试验第33-35页
       ·荧光免疫法第35-36页
   ·选题目的和意义第36-38页
第二章 基于单域重链抗体的天然噬菌体文库构建与鉴定第38-62页
   ·材料与方法第38-50页
     ·材料第38-41页
       ·试剂与溶液第38-39页
       ·淋巴细胞第39页
       ·菌株及噬菌粒第39-40页
       ·引物第40页
       ·主要仪器与设备第40-41页
     ·方法第41-50页
       ·全血中白细胞的分离第41页
       ·总RNA提取第41-42页
       ·反转录第42-43页
       ·半巢式PCR第43-45页
       ·巢式PCR第45页
       ·文库构建第45-47页
       ·噬菌体扩增和滴度测定第47-48页
       ·文库质量评价第48-49页
       ·噬菌体文库的救援与库容测定第49-50页
       ·琼脂糖凝胶电泳第50页
   ·实验结果第50-60页
     ·总RNA的提取与分析第50-51页
     ·全套可变区基因的获取第51-54页
       ·半巢式PCR法第51-53页
       ·巢式PCR法第53-54页
     ·连接与电转化第54-55页
     ·文库的鉴定第55-59页
       ·文库SNAL的鉴定第55-57页
       ·文库NAL的鉴定第57-59页
     ·噬菌体文库的库容第59-60页
   ·讨论第60-61页
     ·全套可变区基因的克隆第60页
     ·抗体库容量与多样性第60-61页
   ·本章小结第61-62页
第三章 抗DON特异性适配体的淘选与鉴定第62-78页
   ·材料与方法第62-67页
     ·材料第62-64页
       ·主要试剂第62-63页
       ·溶液配制第63页
       ·主要仪器与设备第63-64页
     ·方法第64-67页
       ·噬菌体文库的淘选第64页
       ·洗脱噬菌体的扩增与纯化第64-65页
       ·洗脱噬菌体以及扩增产物滴度的测定第65页
       ·噬菌粒的救援第65-66页
       ·间接phage-ELISA第66-67页
       ·间接竞争phage-ELISA第67页
       ·序列测定与分析第67页
   ·实验结果第67-75页
     ·文库SNA-PDL的淘选与鉴定第67-72页
       ·文库淘选第67-68页
       ·噬菌体克隆的鉴定第68-71页
       ·序列测定与分析第71-72页
     ·文库NA-PDL的淘选与鉴定第72-75页
       ·文库淘选第72-74页
       ·噬菌体克隆的鉴定第74-75页
       ·序列测定第75页
   ·讨论第75-77页
     ·噬菌体展示系统的选择第75-76页
     ·影响淘选结果的因素第76-77页
   ·本章小结第77-78页
第四章 抗DON特异性适配体的诱导表达与活性初步研究第78-87页
   ·材料与方法第78-81页
     ·材料第78-79页
     ·方法第79-81页
       ·诱导表达第79页
       ·目的蛋白分析第79-80页
       ·蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳第80页
       ·方阵(棋盘)滴定第80页
       ·竞争ELISA法分析表达产物活性第80-81页
   ·实验结果第81-83页
     ·目的蛋白分析第81-82页
     ·抗原包被浓度及抗体工作浓度第82页
     ·表达产物活性分析第82-83页
   ·讨论第83-86页
     ·外源蛋白(多肽)的表达第83-85页
     ·表达产物活性的分析第85-86页
   ·本章小结第86-87页
主要研究结果及进一步研究设想第87-89页
参考文献第89-97页
附录A 各类克隆的(共有)氨基酸序列第97-99页
在读期间撰写的论文及专利第99-100页
致谢第100页

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