| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 嗜盐古菌简介 | 第11-12页 |
| 1.1.1 嗜盐古菌定义 | 第11页 |
| 1.1.2 嗜盐古菌分类学地位 | 第11-12页 |
| 1.2 高盐环境中的嗜盐古菌 | 第12-14页 |
| 1.2.1 自然高盐环境与人工高盐环境 | 第12页 |
| 1.2.2 我国天然盐湖、人工盐场内嗜盐古菌多样性研究概述 | 第12-14页 |
| 1.3 枯草杆菌蛋白酶类蛋白 | 第14-18页 |
| 1.3.1 蛋白酶定义与分类 | 第14-15页 |
| 1.3.2 丝氨酸蛋白酶简介 | 第15-17页 |
| 1.3.3 枯草杆菌蛋白酶类蛋白简介 | 第17-18页 |
| 1.3.4 Subtilases的加工成熟 | 第18页 |
| 1.4 嗜盐古菌胞外蛋白酶 | 第18-22页 |
| 1.4.1 嗜盐蛋白酶 | 第18-19页 |
| 1.4.2 嗜盐古菌胞外蛋白酶研究起步阶段 | 第19页 |
| 1.4.3 嗜盐古菌胞外蛋白酶分子与机制研究阶段 | 第19-22页 |
| 1.5 嗜盐古菌胞外蛋白酶与高盐食品发酵 | 第22-23页 |
| 1.6 立题依据与研究意义 | 第23页 |
| 1.7 主要研究内容 | 第23-25页 |
| 1.7.1 两种类型高盐环境中嗜盐古菌多样性的研究 | 第23-24页 |
| 1.7.2 嗜盐古菌胞外蛋白酶多样性研究和纯酶复性研究 | 第24页 |
| 1.7.3 鱼露发酵小试实验 | 第24-25页 |
| 第二章 茶卡盐碱湖与大连营城子盐场嗜盐古菌多样性研究 | 第25-50页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-28页 |
| 2.1.1 主要仪器与设备 | 第25页 |
| 2.1.2 样品采集 | 第25-26页 |
| 2.1.3 菌株分离与培养 | 第26页 |
| 2.1.4 菌株的快速鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.5 基于16SrRNA基因的系统发育分析 | 第27页 |
| 2.1.6 嗜盐古菌多样性分析 | 第27-28页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第28-49页 |
| 2.2.1 茶卡盐碱湖沉积盐与湖水中可培养嗜盐古菌菌株信息 | 第28-32页 |
| 2.2.2 茶卡盐湖嗜盐古菌系统发育分析 | 第32-36页 |
| 2.2.3 大连营城子盐场内可培养嗜盐古菌菌株信息 | 第36-40页 |
| 2.2.4 大连营城子盐场嗜盐古菌系统发育分析 | 第40-46页 |
| 2.2.5 茶卡盐碱湖与大连营城子盐场可培养嗜盐古菌多样性分析 | 第46-49页 |
| 2.3 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 两类型盐环境嗜盐古菌多相分类研究 | 第50-68页 |
| 3.1 材料与方法 | 第50-56页 |
| 3.1.1 主要仪器与设备 | 第50页 |
| 3.1.2 培养基 | 第50页 |
| 3.1.3 菌株表型特征鉴定 | 第50-51页 |
| 3.1.4 生理学特征 | 第51页 |
| 3.1.5 生化特征 | 第51-53页 |
| 3.1.6 抗生素敏感特性 | 第53-54页 |
| 3.1.7 营养类型 | 第54页 |
| 3.1.8 化学组分特征—细胞极性脂组分鉴定 | 第54-55页 |
| 3.1.9 嗜盐古菌总DNA的G+Cmol%含量测定 | 第55-56页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第56-67页 |
| 3.2.1 菌株C46的多相分类学研究 | 第56-60页 |
| 3.2.2 菌株DL47和DL50的多相分类学研究 | 第60-67页 |
| 3.3 本章小结 | 第67-68页 |
| 第四章 嗜盐古菌胞外蛋白酶多样性与酶基因的异源表达与复性 | 第68-96页 |
| 4.1 材料与方法 | 第68-71页 |
| 4.1.1 菌株 | 第68-69页 |
| 4.1.2 质粒 | 第69页 |
| 4.1.3 引物 | 第69页 |
| 4.1.4 主要仪器与设备 | 第69页 |
| 4.1.5 药品与试剂 | 第69-70页 |
| 4.1.6 培养基 | 第70页 |
| 4.1.7 主要缓冲液与溶液的配置 | 第70-71页 |
| 4.2 试验方法 | 第71-72页 |
| 4.2.1 产胞外蛋白酶菌株筛选与种属鉴定 | 第71-72页 |
| 4.2.2 产酶菌株对底物酪蛋白和明胶的水解特异性分析 | 第72页 |
| 4.2.3 胞外蛋白酶催化类型多样性分析 | 第72页 |
| 4.2.4 胞外蛋白酶基因获取与生物信息学分析 | 第72页 |
| 4.2.5 引物设计与合成 | 第72页 |
| 4.3 基因C450_13147在HaloferaxvolcaniiH1424中的异源表达 | 第72-75页 |
| 4.3.1 PCR扩增目的基因 | 第72-73页 |
| 4.3.2 目的基因的回收与纯化 | 第73页 |
| 4.3.3 C450_13147基因与载体的双酶切 | 第73-74页 |
| 4.3.4 C450_13147PCR产物与载体连接 | 第74页 |
| 4.3.5 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第74页 |
| 4.3.6 重组表达载体pTA06-13147转化大肠杆菌DH5α | 第74-75页 |
| 4.3.7 HaloferaxvolcaniiH1424的转化与C450_13147功能验证 | 第75页 |
| 4.4 基因C450_13147在大肠杆菌BL21中诱导表达及纯化 | 第75-78页 |
| 4.4.1 重组表达载体pET28a(+)-13147的构建与验证 | 第76页 |
| 4.4.2 质粒pET28a(+)-13147双酶切验证 | 第76-77页 |
| 4.4.3 阳性重组质粒的测序验证 | 第77页 |
| 4.4.4 C450_13147的诱导表达 | 第77页 |
| 4.4.5 C450_13147的纯化 | 第77-78页 |
| 4.5 C450_13147前体蛋白酶复性效果的SDS-PAGE验证 | 第78页 |
| 4.6 结果与讨论 | 第78-94页 |
| 4.6.1 产胞外蛋白酶种属多样性分析 | 第78-79页 |
| 4.6.2 实验菌株胞外粗酶的底物水解特异性与催化类型多样性分析 | 第79-80页 |
| 4.6.3 C450_13147的生物信息学分析 | 第80-83页 |
| 4.6.4 C450_13147蛋白酶功能验证结果 | 第83页 |
| 4.6.5 C450_13147目的基因的PCR扩增与阳性重组子的验证 | 第83-85页 |
| 4.6.6 诱导表达与纯化效果分析 | 第85-88页 |
| 4.6.7 高盐条件下的10倍稀释复性 | 第88-90页 |
| 4.6.8 C450_13147的成熟方式 | 第90-92页 |
| 4.6.9 C450_13147的快速复性 | 第92-94页 |
| 4.7 本章小结 | 第94-96页 |
| 第五章 酶基因C450_13147表达菌株发酵鱼露的研究 | 第96-103页 |
| 5.1 材料与方法 | 第96-98页 |
| 5.1.1 药品与试剂 | 第97页 |
| 5.1.2 培养基 | 第97页 |
| 5.1.3 实验原料与菌种 | 第97页 |
| 5.1.4 发酵菌株准备 | 第97页 |
| 5.1.5 鱼露发酵液制备 | 第97页 |
| 5.1.6 鱼露发酵指标测定 | 第97-98页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第98-101页 |
| 5.2.1 鱼露发酵过程中的TSN、AAN、游离肽的含量变化分析 | 第98-100页 |
| 5.2.2 鱼露发酵过程中游离氨基酸含量及组成分析 | 第100-101页 |
| 5.3 本章小结 | 第101-103页 |
| 第六章 主要结论与展望 | 第103-106页 |
| 6.1 主要结论 | 第103-105页 |
| 6.2 主要展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 在读学位期间发表论文 | 第117-118页 |
| 附录A | 第118页 |
