| 中文摘要 | 第8-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 缩略语 | 第16-18页 |
| 引言 | 第18-20页 |
| 第一部分 基于RUNX2转录活性的高通量筛选与化合物T63的抗骨质疏松作用机制研究 | 第20-82页 |
| 1.1 前言 | 第20-21页 |
| 1.2 实验材料与仪器 | 第21-26页 |
| 1.2.1 细胞株与质粒 | 第21-22页 |
| 1.2.2 实验动物 | 第22页 |
| 1.2.3 试剂与耗材 | 第22-23页 |
| 1.2.4 仪器 | 第23-24页 |
| 1.2.5 主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 1.3 实验方法 | 第26-38页 |
| 1.3.1 细胞培养及成骨细胞分化、成脂分化的诱导 | 第26-27页 |
| 1.3.2 基于RUNX2转录活性的高通量筛选 | 第27-28页 |
| 1.3.3 EC50的测定 | 第28页 |
| 1.3.4 MTT法测定细胞活力 | 第28页 |
| 1.3.5 p-NPP法测定ALPL活性 | 第28-29页 |
| 1.3.6 茜素红染色 | 第29页 |
| 1.3.7 油红染色 | 第29-30页 |
| 1.3.8 RT-PCR | 第30-32页 |
| 1.3.9 胞浆蛋白和核蛋白的分离提取 | 第32页 |
| 1.3.10 Western blot | 第32页 |
| 1.3.11 质粒转染 | 第32-33页 |
| 1.3.12 荧光素报告基因活性检测 | 第33页 |
| 1.3.13 流式细胞术(FACS)测定细胞内活性氧自由基水平 | 第33页 |
| 1.3.14 基因敲低实验 | 第33-34页 |
| 1.3.15 染色质免疫共沉淀实验(ChIP) | 第34-35页 |
| 1.3.16 TRAP染色 | 第35页 |
| 1.3.17 F-actin环形成实验 | 第35-36页 |
| 1.3.18 动物实验 | 第36-37页 |
| 1.3.19 骨密度的检测 | 第37页 |
| 1.3.20 苏木素—伊红染色法(HE)染色和甲苯胺蓝染色 | 第37页 |
| 1.3.21 ELISA实验 | 第37页 |
| 1.3.22 急性毒性实验 | 第37页 |
| 1.3.23 数据分析与图形绘制 | 第37-38页 |
| 1.4 实验结果 | 第38-72页 |
| 一、化合物T63的发现与其体外诱导成骨细胞分化的作用 | 第38-60页 |
| 1.4.1 小分子化合物库的高通量筛选与T63的发现 | 第38-40页 |
| 1.4.2 T63上调RUNX2的转录活性 | 第40-41页 |
| 1.4.3 T63不影响小鼠成骨细胞增殖 | 第41-42页 |
| 1.4.4 T63诱导小鼠成骨细胞分化 | 第42-46页 |
| 1.4.5 T63诱导人成骨细胞的分化 | 第46-47页 |
| 1.4.6 T63抑制成脂分化 | 第47-49页 |
| 1.4.7 T63调节成骨细胞分化依赖于RUNX2 | 第49-52页 |
| 1.4.8 T63激活BMPs和经典的WNT/β-catenin信号通路 | 第52-59页 |
| 1.4.9 BMPs与WNT/β-catenin信号通路之间的相互调节作用 | 第59页 |
| 1.4.10 T63降低细胞内的ROS水平 | 第59-60页 |
| 1.4.11 T63上调雌激素应答元件转录活性 | 第60页 |
| 二、T63体外抑制破骨形成的作用 | 第60-68页 |
| 1.4.12 T63抑制RANKL的表达 | 第60-61页 |
| 1.4.13 T63抑制成骨-破骨细胞共培养体系中破骨细胞的形成 | 第61页 |
| 1.4.14 T63对RAW264.7细胞的细胞毒作用 | 第61-62页 |
| 1.4.15 T63抑制RANKL诱导的破骨细胞的形成 | 第62-64页 |
| 1.4.16 T63抑制F-actin环的形成 | 第64页 |
| 1.4.17 T63抑制破骨分化相关基因的表达 | 第64-65页 |
| 1.4.18 T63抑制NFATc1的表达 | 第65-66页 |
| 1.4.19 T63抑制RANKL下游MAPKs和Akt信号通路 | 第66-68页 |
| 三、T63的体内抗骨质疏松活性 | 第68-72页 |
| 1.4.20 T63不影响实验动物的体重 | 第68页 |
| 1.4.21 T63可升高骨质疏松模型大鼠降低的骨密度 | 第68-69页 |
| 1.4.22 T63可增加骨质疏松模型大鼠的骨体积分数 | 第69-70页 |
| 1.4.23 T63影响血清生化指标的水平 | 第70-71页 |
| 1.4.24 T63增加骨质疏松模型大鼠成骨细胞的数目 | 第71页 |
| 1.4.25 T63抑制骨质疏松模型大鼠破骨细胞的形成 | 第71-72页 |
| 四、T63的急性毒性研究 | 第72页 |
| 1.5 讨论 | 第72-76页 |
| 1.6 小结 | 第76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 第二部分 NF-KB转录活性抑制剂的筛选及秦皮甲素(AES)抑制破骨分化效应的研究 | 第82-106页 |
| 2.1 前言 | 第82-83页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第83页 |
| 2.2.1 细胞株与质粒 | 第83页 |
| 2.2.2 实验动物 | 第83页 |
| 2.2.3 试剂 | 第83页 |
| 2.2.4 仪器 | 第83页 |
| 2.3 实验方法 | 第83-85页 |
| 2.3.1 稳定转染NF-κB-Luc细胞株的构建 | 第83-84页 |
| 2.3.2 荧光素报告基因筛选体系 | 第84页 |
| 2.3.3 基因过表达 | 第84页 |
| 2.3.4 动物实验 | 第84页 |
| 2.3.5 其它方法 | 第84页 |
| 2.3.6 数据分析 | 第84-85页 |
| 2.4 实验结果 | 第85-99页 |
| 2.4.1 NF-κB抑制剂筛选模型的建立与天然化合物的筛选 | 第85-88页 |
| 2.4.2 AES不影响RAW264.7细胞的增殖 | 第88-89页 |
| 2.4.3 AES抑制RANKL诱导的破骨细胞分化 | 第89-91页 |
| 2.4.4 AES抑制RANKL诱导的F-actin环的形成 | 第91-92页 |
| 2.4.5 AES抑制破骨分化相关的基因表达 | 第92-93页 |
| 2.4.6 AES抑制MAPKs和NF-κB信号通路 | 第93页 |
| 2.4.7 AES抑制NFATc1和RANK的表达 | 第93-94页 |
| 2.4.8 AES抑制破骨分化作用依赖于RANK的表达 | 第94-95页 |
| 2.4.9 AES不影响成骨细胞分化 | 第95-96页 |
| 2.4.10 AES不影响动物体重 | 第96-97页 |
| 2.4.11 AES可以增加骨质疏松模型大鼠降低的骨密度 | 第97-98页 |
| 2.4.12 AES升高骨质疏松模型大鼠骨体积分数 | 第98页 |
| 2.4.13 AES影响骨质疏松模型大鼠血清中生物标记物的水平 | 第98-99页 |
| 2.5 讨论 | 第99-102页 |
| 2.6 小结 | 第102页 |
| 参考文献 | 第102-106页 |
| 结论 | 第106-108页 |
| 文献综述 | 第108-121页 |
| 参考文献 | 第115-121页 |
| 个人简历 | 第121-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
