| 摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 文献综述 | 第11-18页 |
| 1. 黑色素生成研究 | 第11-12页 |
| 1.1 黑色素生物学特性 | 第11页 |
| 1.2 紫外线辐射与黑色素生成 | 第11页 |
| 1.3 黑色素生成相关基因 | 第11-12页 |
| 2. miRNAs及其与皮肤相关的研究 | 第12页 |
| 3. 外泌体相关研究 | 第12-18页 |
| 3.1 外泌体的生物学特性 | 第13-14页 |
| 3.2 外泌体的功能 | 第14-15页 |
| 3.3 外泌体在皮肤生理和病理过程的应用 | 第15-18页 |
| 实验一 外源性miR-330-5p下调黑色素细胞中TYR表达 | 第18-29页 |
| 1 实验材料与主要试剂仪器 | 第18页 |
| 1.1 实验材料 | 第18页 |
| 1.2 实验试剂与仪器 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.1 小鼠黑色素细胞的培养 | 第18-19页 |
| 2.2 miR-330-5p转染小鼠黑色素细胞 | 第19页 |
| 2.3 黑色素含量的测定 | 第19页 |
| 2.4 细胞总RNA和总蛋白的提取 | 第19-20页 |
| 2.5 qRT-PCR检测TYR及其下游基因 | 第20-23页 |
| 2.6 Western Blotting分析TYR及其下游基因 | 第23页 |
| 2.7 数据处理 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-28页 |
| 3.1 miR-330-5p转染小鼠黑色素细胞及效率 | 第24-26页 |
| 3.2 转染后细胞内黑色素含量 | 第26页 |
| 3.3 转染后细胞内TYR及其下游基因mRNA表达水平 | 第26-27页 |
| 3.4 转染后细胞内TYR及其下游蛋白表达水平 | 第27-28页 |
| 4 小结 | 第28-29页 |
| 实验二 角化细胞源外泌体的分离与鉴定 | 第29-35页 |
| 1 实验材料与主要试剂仪器 | 第29页 |
| 1.1 实验材料 | 第29页 |
| 1.2 实验试剂与仪器 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-31页 |
| 2.1 小鼠角化细胞的培养 | 第29-30页 |
| 2.2 免疫荧光法分析角化细胞中外泌体特异性蛋白的表达 | 第30页 |
| 2.3 角化细胞转染mR-330-5p | 第30页 |
| 2.4 获得富含外泌体的培养基 | 第30页 |
| 2.5 超速离心法分离提取外泌体 | 第30-31页 |
| 2.6 外泌体总蛋白的提取 | 第31页 |
| 2.7 Western Blotting分析外泌体特异性蛋白 | 第31页 |
| 2.8 外泌体总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.9 qRT-PCR检测外泌体中miR-330-5p | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-34页 |
| 3.1 小鼠角化细胞形态 | 第31-32页 |
| 3.2 TSG101在角化细胞上的表达 | 第32-33页 |
| 3.3 TSG101和CD9在外泌体蛋白中的表达 | 第33页 |
| 3.4 转染后角化细胞分泌的外泌体miR-330-5p表达水平 | 第33-34页 |
| 4 小结 | 第34-35页 |
| 实验三 角化细胞源性外泌体携带miR-330-5p与黑色素细胞的相互作用 | 第35-42页 |
| 1 实验材料与主要试剂仪器 | 第35页 |
| 1.1 实验材料 | 第35页 |
| 1.2 实验试剂与材料 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-36页 |
| 2.1 外泌体与黑色素细胞共培养 | 第35页 |
| 2.2 荧光原位双杂交 | 第35-36页 |
| 2.3 miR-330-5p转染小鼠角化细胞 | 第36页 |
| 2.4 黑色素细胞免疫荧光 | 第36页 |
| 2.5 黑色素含量测定 | 第36页 |
| 2.6 黑色素细胞总RNA和总蛋白的提取 | 第36页 |
| 2.8 qRT-PCR检测TYR及其上下游基因 | 第36页 |
| 2.9 Western Blotting分析TYR及其上下游基因 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-41页 |
| 3.1 黑色素细胞荧光原位杂交结果 | 第36-38页 |
| 3.2 外源性外泌体在黑色素细胞中的表达 | 第38页 |
| 3.3 共培养后细胞内黑色素含量 | 第38-39页 |
| 3.4 共培养后细胞内TYR及其上下游基因mRNA表达水平 | 第39-40页 |
| 3.5 共培养后细胞内TYR及其上下游蛋白表达水平 | 第40-41页 |
| 4 小结 | 第41-42页 |
| 讨论 | 第42-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| Abstract | 第52-53页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 在读研究生期间发表论文 | 第54-55页 |
| 中英文对照及缩略表 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
