| 致谢 | 第5-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-23页 |
| 第一章 隐孢子虫IgY抗体的研究进展 | 第13-19页 |
| 1 隐孢子虫的分类及病原形态特征 | 第13页 |
| 1.1 隐孢子虫的分类 | 第13页 |
| 1.2 隐孢子虫的病原形态特征 | 第13页 |
| 2 隐孢子虫抗原抗体分析 | 第13-15页 |
| 3 微小隐孢子虫卵囊的收集与纯化 | 第15-16页 |
| 4 IgY的研究进展 | 第16-19页 |
| 4.1 IgY的分子结构 | 第16页 |
| 4.2 IgY的特性 | 第16-17页 |
| 4.3 IgY的制备 | 第17页 |
| 4.3.1 蛋鸡的免疫 | 第17页 |
| 4.3.2 IgY的提取 | 第17页 |
| 4.4 IgY的应用 | 第17-19页 |
| 4.4.1 IgY在免疫检测中的应用 | 第17-18页 |
| 4.4.2 IgY在疾病治疗中的应用 | 第18-19页 |
| 第二章 免疫学检测方法 | 第19-23页 |
| 1 免疫荧光检测 | 第19-20页 |
| 1.1 直接免疫荧光法 | 第19页 |
| 1.2 间接免疫荧光法 | 第19-20页 |
| 2 免疫层析法 | 第20页 |
| 3 免疫磁珠分离法 | 第20页 |
| 4 酶联免疫吸附剂测定法 | 第20-23页 |
| 第二部分 牛源微小隐孢子虫卵囊纯化方法的优选 | 第23-29页 |
| 1 引言 | 第23页 |
| 2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1 主要试剂及配置 | 第23页 |
| 2.2 试验动物 | 第23页 |
| 2.3 试验器材与耗材 | 第23-24页 |
| 2.3.1 试验器材 | 第23页 |
| 2.3.2 试验耗材 | 第23-24页 |
| 2.4 感染用卵囊 | 第24页 |
| 3 试验方法 | 第24-25页 |
| 3.1 卵囊的传代和收集 | 第24页 |
| 3.2 卵囊粗提纯 | 第24页 |
| 3.2.1 过滤和水洗 | 第24页 |
| 3.2.2 除去脂质 | 第24页 |
| 3.3 卵囊收集 | 第24-25页 |
| 3.3.1 饱和蔗糖溶液漂浮法 | 第24-25页 |
| 3.3.2 饱和硫酸锌法 | 第25页 |
| 3.3.3 饱和食盐水漂浮法 | 第25页 |
| 3.4 卵囊纯化 | 第25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-28页 |
| 4.1 卵囊传代结果分析 | 第25-26页 |
| 4.2 除脂效果观察 | 第26页 |
| 4.3 三种卵囊收集方法的比较分析 | 第26-27页 |
| 4.4 卵囊纯化的结果 | 第27-28页 |
| 5 讨论 | 第28-29页 |
| 第三部分 抗微小隐孢子虫IgG和IgY的制备及间接ELISA方法的建立 | 第29-41页 |
| 1 引言 | 第29页 |
| 2 试验材料 | 第29-31页 |
| 2.1 样品来源 | 第29页 |
| 2.2 试验动物 | 第29页 |
| 2.3 主要仪器及耗材 | 第29-30页 |
| 2.3.1 试验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3.2 试验耗材 | 第30页 |
| 2.4 主要试剂及制备 | 第30-31页 |
| 3 试验方法 | 第31-35页 |
| 3.1 抗原的制备 | 第31页 |
| 3.2 抗原蛋白含量的测定 | 第31页 |
| 3.3 免疫用疫苗的制备 | 第31页 |
| 3.4 家兔的免疫 | 第31-32页 |
| 3.4.1 免疫程序 | 第31-32页 |
| 3.4.2 血清的采集 | 第32页 |
| 3.4.3 分离血清 | 第32页 |
| 3.5 蛋鸡的免疫 | 第32页 |
| 3.5.1 免疫程序 | 第32页 |
| 3.5.2 鸡蛋的收集 | 第32页 |
| 3.6 抗体的纯化 | 第32-33页 |
| 3.6.1 透析袋使用前处理 | 第32-33页 |
| 3.6.2 盐析法纯化IgG | 第33页 |
| 3.6.3 水稀释硫酸铵盐析法纯化IgY | 第33页 |
| 3.7 间接ELISA程序 | 第33-34页 |
| 3.8 兔抗微小隐孢子虫血清抗体效价的测定 | 第34页 |
| 3.9 间接ELISA检测IgY效价 | 第34-35页 |
| 3.9.1 间接ELISA检测方法的建立 | 第34-35页 |
| 3.9.2 检测卵黄间接ELISA结果的判定 | 第35页 |
| 3.9.3 检测性试验 | 第35页 |
| 3.9.3.1 特异性试验 | 第35页 |
| 3.9.3.2 重复性试验 | 第35页 |
| 3.9.3.3 敏感性试验 | 第35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-38页 |
| 4.1 抗原的蛋白含量 | 第35页 |
| 4.2 血清效价 | 第35页 |
| 4.3 卵黄抗体效价 | 第35-38页 |
| 4.3.1 间接ELISA方法的建立 | 第36-37页 |
| 4.3.2 检测性试验 | 第37-38页 |
| 4.3.2.1 特异性试验 | 第37-38页 |
| 4.3.2.2 重复性试验 | 第38页 |
| 4.3.2.3 敏感性试验 | 第38页 |
| 5 讨论 | 第38-41页 |
| 第四部分 双抗体夹心ELISA检测微小隐孢子虫方法的建立及应用 | 第41-55页 |
| 1 引言 | 第41页 |
| 2 试验材料 | 第41页 |
| 2.1 试验仪器 | 第41页 |
| 2.2 主要溶液的配制 | 第41页 |
| 3 试验方法 | 第41-46页 |
| 3.1 夹心ELISA方法的工作流程 | 第41-42页 |
| 3.2 双抗体夹心ELISA最优条件的确定 | 第42-43页 |
| 3.2.1 捕获抗体和检测抗体最佳工作浓度的测定 | 第42页 |
| 3.2.2 最佳包被条件的确定 | 第42页 |
| 3.2.3 抗原最佳浓度的确定 | 第42页 |
| 3.2.4 最佳(检测抗体)IgY作用时间 | 第42页 |
| 3.2.5 最佳酶标抗体工作浓度的确定 | 第42页 |
| 3.2.6 最佳酶标抗体作用时间的确定 | 第42-43页 |
| 3.2.7 最佳显色时间的确定 | 第43页 |
| 3.2.8 最佳终止条件的选择 | 第43页 |
| 3.3 双抗体夹心ELISA方法的评价 | 第43页 |
| 3.3.1 重复性试验 | 第43页 |
| 3.3.2 特异性试验 | 第43页 |
| 3.3.3 敏感性试验 | 第43页 |
| 3.3.4 不同存放时间的卵囊 | 第43页 |
| 3.4 初步应用 | 第43-46页 |
| 3.4.1 扩增18SrRNA序列的引物 | 第43页 |
| 3.4.2 人工植入卵囊 | 第43-44页 |
| 3.4.3 样品的处理方式 | 第44-45页 |
| 3.4.3.1 饱和食盐水漂浮法 | 第44页 |
| 3.4.3.2 饱和蔗糖溶液漂浮法 | 第44页 |
| 3.4.3.3 PBST洗涤剂处理 | 第44页 |
| 3.4.3.4 三组共108份处理过的样品进行破碎处理 | 第44-45页 |
| 3.4.3.5 第四组样品提取DNA | 第45页 |
| 3.4.4 四组样品的检测 | 第45页 |
| 3.4.5 第4组DNA样品基于18SrRNA进行PCR扩增 | 第45-46页 |
| 4 结果与分析 | 第46-53页 |
| 4.1 夹心ELISA方法的建立 | 第46-49页 |
| 4.1.1 捕获抗体和检测抗体最佳工作浓度的测定 | 第46页 |
| 4.1.2 抗原最佳浓度的确定 | 第46-47页 |
| 4.1.3 最佳包被条件的确定 | 第47页 |
| 4.1.4 检测抗体IgY最佳作用时间 | 第47-48页 |
| 4.1.5 最佳酶标抗体工作浓度的确定 | 第48页 |
| 4.1.6 酶标抗体最佳作用时间 | 第48页 |
| 4.1.7 最佳显色时间的确定 | 第48页 |
| 4.1.8 最佳终止条件的确定 | 第48-49页 |
| 4.2 检测性试验结果 | 第49-51页 |
| 4.2.1 特异性试验 | 第49页 |
| 4.2.2 敏感性试验 | 第49页 |
| 4.2.3 重复性试验 | 第49-50页 |
| 4.2.4 卵囊的不同存放时间 | 第50-51页 |
| 4.3 初步应用 | 第51-53页 |
| 4.3.1 基于18srRNAPCR扩增结果 | 第51页 |
| 4.3.2 用建立好的夹心ELISA检测 1、2、3 三组样品 | 第51-52页 |
| 4.3.3 以上三种处理方法的检测结果与巢式PCR结果比较 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-55页 |
| 结论和创新点 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| ABSTRACT | 第65-66页 |
| 个人简介 | 第67页 |
