| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 前言 | 第13-23页 |
| 1 情志应激与非酒精性脂肪肝(NAFLD) | 第13-14页 |
| 2 NAFLD的发病机制及治疗方案 | 第14-16页 |
| 3 NAFLD的脂肪酸代谢谱特征 | 第16-17页 |
| 4 应激激素CORT与脂肪酸代谢 | 第17-18页 |
| 5 Sirtuin3(SIRT3)与脂肪酸代谢 | 第18-20页 |
| 6 Theacrine在能量代谢及肝脏相关疾病方面的作用 | 第20-21页 |
| 7 主要研究目的及内容 | 第21-23页 |
| 第一章 情志应激增加NAFLD“易感性”及其机制研究 | 第23-60页 |
| 1 前言 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.1 实验试剂 | 第23-25页 |
| 2.2 实验仪器 | 第25页 |
| 2.3 试剂配制 | 第25-27页 |
| 2.4 .动物实验及设计 | 第27-28页 |
| 2.5 生化指标分析 | 第28-29页 |
| 2.6 组织学观察及免疫组化分析 | 第29页 |
| 2.7 细胞培养及细胞给药 | 第29-30页 |
| 2.8 液相色谱/质谱联用法(LC/MS)测定脂酰肉碱水平 | 第30页 |
| 2.9 反转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析 | 第30-31页 |
| 2.10 线粒体制备 | 第31页 |
| 2.11 Westernblot分析 | 第31-32页 |
| 2.12 免疫沉淀法检测LCAD乙酰化 | 第32-33页 |
| 2.13 偏最小二乘判别分析(PLS-DA) | 第33页 |
| 2.14 肝脏组织及细胞SIRT3活性的测定 | 第33页 |
| 2.15 免疫荧光分析 | 第33-34页 |
| 2.16 肝脏内脂滴分离 | 第34页 |
| 2.17 免疫共沉淀法测定GR与ADFP的相互作用 | 第34-35页 |
| 2.18 数据统计与分析 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-54页 |
| 3.1 拘束应激增敏HFD喂养ApoE-/-小鼠的脂肪肝炎 | 第35-37页 |
| 3.2 拘束应激引起NAFLD小鼠脂酰肉碱代谢紊乱 | 第37-39页 |
| 3.3 应激激素CORT增敏HFD喂养小鼠的肝脏大泡型脂肪变性 | 第39-42页 |
| 3.4 情志应激抑制NAFLD小鼠肝脏SIRT3/LCAD信号通路功能 | 第42-45页 |
| 3.5 情志应激上调NAFLD小鼠肝脏ADFP蛋白及PLIN2基因的表达 | 第45-46页 |
| 3.6 情志应激增加NAFLD小鼠肝脏中细胞质GR转位进入细胞核 | 第46-47页 |
| 3.7 阻断GR逆转应激激素CORT对SIRT3、LCAD及PLIN2的调控 | 第47-48页 |
| 3.8 应激激素CORT增加GR与ADFP相互作用进而促进脂滴形成 | 第48-51页 |
| 3.9 应激激素CS增加oleate诱导的HepG2细胞的脂质堆积 | 第51-54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 5 小结 | 第58-60页 |
| 第二章 Theacrine改善情志应激易感的NAFLD | 第60-78页 |
| 1 前言 | 第60-61页 |
| 2 材料与方法 | 第61-69页 |
| 2.1 实验试剂 | 第61-62页 |
| 2.2 实验仪器 | 第62页 |
| 2.3 试剂配制 | 第62-64页 |
| 2.4 Theacrine制备与其结构鉴定 | 第64-65页 |
| 2.5 动物实验及设计 | 第65-66页 |
| 2.6 生化指标分析 | 第66页 |
| 2.7 组织学观察及免疫组化学观察 | 第66页 |
| 2.8 LC/MS法测定脂酰肉碱水平 | 第66页 |
| 2.9 RT-qPCR分析 | 第66页 |
| 2.10 Westernblot分析 | 第66-67页 |
| 2.11 免疫沉淀检测LCAD乙酰化 | 第67页 |
| 2.12 HPLC-UV法检测ATP及ADP水平 | 第67页 |
| 2.13 细胞培养及细胞给药 | 第67-68页 |
| 2.14 数据统计与分析 | 第68-69页 |
| 3 实验结果 | 第69-76页 |
| 3.1 Theacrine降低拘束应激易感NAFLD小鼠血浆及肝脏长链脂酰肉碱水平 | 第69页 |
| 3.2 Theacrine增强CORT易感NAFLD小鼠肝脏SIRT3/LCAD信号通路的功能 | 第69-70页 |
| 3.3 Theacrine抑制CORT易感NAFLD小鼠肝脏的大泡型脂肪变性 | 第70-72页 |
| 3.4 Theacrine改善拘束应激易感NAFLD小鼠的脂肪肝炎 | 第72-74页 |
| 3.5 Theacrine改善CS易感NAFLD体外模型的脂肪变性 | 第74-75页 |
| 3.6 Theacrine抑制情志应激易感NAFLD小鼠肝脏的细胞质GR转位进入细胞核 | 第75-76页 |
| 4 讨论 | 第76-77页 |
| 5 小结 | 第77-78页 |
| 第三章 Theacrine改善HFD诱导NAFLD的作用及机制研究 | 第78-113页 |
| 第一节 Theacrine改善HFD诱导ApoE-/-小鼠NAFLD | 第78-103页 |
| 1 前言 | 第78页 |
| 2 材料与方法 | 第78-88页 |
| 2.1 实验试剂 | 第78-79页 |
| 2.2 实验仪器 | 第79-80页 |
| 2.3 试剂配制 | 第80-82页 |
| 2.4 动物实验设计 | 第82页 |
| 2.5 生化指标检测 | 第82页 |
| 2.6 组织学观察及免疫组化学观察 | 第82-83页 |
| 2.7 HPLC-UV法检测ATP及ADP水平 | 第83页 |
| 2.8 LC/MS法测定脂酰肉碱水平 | 第83页 |
| 2.9 线粒体制备 | 第83页 |
| 2.10 LCAD活性测定 | 第83-84页 |
| 2.11 RT-qPCR分析 | 第84-85页 |
| 2.12 Westernblot分析 | 第85页 |
| 2.13 免疫沉淀法检测LCAD乙酰化 | 第85页 |
| 2.14 细胞培养及处理 | 第85页 |
| 2.15 siRNA转染 | 第85-86页 |
| 2.16 PLS-DA | 第86页 |
| 2.17 脂肪酸的衍生化及脂肪酸、柠檬酸的提取 | 第86页 |
| 2.18 GC/MS分析 | 第86-87页 |
| 2.19 13C-标记脂肪酸代谢分析 | 第87页 |
| 2.20 细胞培养及处理 | 第87页 |
| 2.21 数据统计与分析 | 第87-88页 |
| 3 实验结果 | 第88-100页 |
| 3.1 Theacrine抑制HFD诱导NAFLD小鼠肝脏的脂肪变性及炎症 | 第88-89页 |
| 3.2 Theacrine降低HFD诱导NAFLD小鼠血脂水平并增加肝脏ATP | 第89-90页 |
| 3.3 Theacrine改善HFD诱导NAFLD小鼠的脂酰肉碱代谢 | 第90-93页 |
| 3.4 Theacrine抑制脂肪酸氧化和脂肪酸延伸和去饱和 | 第93-94页 |
| 3.5 Theacrine上调SIRT3的表达抑制LCAD乙酰化 | 第94-96页 |
| 3.6 Theacrine通过上调SIRT3/LCAD通路进而改善脂酰肉碱代谢 | 第96-100页 |
| 4 讨论 | 第100-102页 |
| 5 小结 | 第102-103页 |
| 第二节 Theacrine靶向与SIRT3结合促进脂酰肉碱代谢 | 第103-113页 |
| 1 前言 | 第103页 |
| 2 材料与方法 | 第103-107页 |
| 2.1 实验试剂 | 第103页 |
| 2.2 实验仪器 | 第103-104页 |
| 2.3 试剂配制 | 第104-105页 |
| 2.4 SIRT3去乙酰化活性测定 | 第105页 |
| 2.5 分子对接docking方法 | 第105-106页 |
| 2.6 siRNA转染 | 第106页 |
| 2.7 H89处理 | 第106页 |
| 2.8 Westernblot分析 | 第106页 |
| 2.9 免疫沉淀法检测LCAD乙酰化 | 第106-107页 |
| 2.10 细胞培养及处理 | 第107页 |
| 2.11 数据统计与分析 | 第107页 |
| 3 实验结果 | 第107-111页 |
| 3.1 Theacrine上调PKA抑制后细胞内SIRT3的活性 | 第107-108页 |
| 3.2 Theacrine靶向与SIRT3结合 | 第108-109页 |
| 3.3 体外模型确证theacrine靶向SIRT3的作用 | 第109-111页 |
| 4 讨论 | 第111页 |
| 5 小结 | 第111-113页 |
| 结论和展望 | 第113-116页 |
| 1 结论 | 第113-114页 |
| 2 创新点 | 第114页 |
| 3 展望 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-134页 |
| 在学期间学术成果 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
