| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词列表 | 第10-11页 |
| 1 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 问题的提出及意义 | 第11-12页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第12-20页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas系统的发现和分类 | 第12-13页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9系统的结构和功能 | 第13-15页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9系统的应用 | 第15-20页 |
| 1.3 植物基因组精准编辑现状 | 第20-21页 |
| 1.4 P19增强的瞬时表达系统 | 第21-22页 |
| 1.5 CPMV-HT系统增强蛋白瞬时表达 | 第22页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.7 研究的内容和技术路线 | 第23-27页 |
| 1.7.1 研究的内容 | 第23页 |
| 1.7.2 研究的技术路线 | 第23-27页 |
| 2 材料及方法 | 第27-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 番茄材料 | 第27页 |
| 2.1.2 质粒载体和菌株种类 | 第27页 |
| 2.1.3 试剂和实验设备 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-41页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第28-29页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9载体构建 | 第29-33页 |
| 2.2.3 农杆菌转化方法 | 第33页 |
| 2.2.4 番茄叶片注射法瞬时侵染 | 第33页 |
| 2.2.5 番茄遗传转化 | 第33-35页 |
| 2.2.6 转基因植株检测 | 第35-36页 |
| 2.2.7 CRISPR/Cas9编辑的检测 | 第36-39页 |
| 2.2.8 测序确定突变方式 | 第39页 |
| 2.2.9 基于OVERLAPPCR的定点突变 | 第39-40页 |
| 2.2.10 抗生素抗性培养基筛选 | 第40-41页 |
| 3 P19m增强基因编辑效率 | 第41-59页 |
| 3.1 扩增P19m片段 | 第41-42页 |
| 3.2 SlPDSgRNA设计 | 第42页 |
| 3.3 PDS-gRNAs-cas9-NPTⅡ及PDS-gRNAs-cas9-NPTⅡ-P19m载体构建 | 第42-44页 |
| 3.4 P19m增强下的CRISPR/Cas9效果检测 | 第44-48页 |
| 3.4.1 瞬时侵染检测 | 第44-47页 |
| 3.4.2 稳定转化检测 | 第47-48页 |
| 3.5 P19m增强下的CRISPR/Cas9系统的应用 | 第48-56页 |
| 3.5.1 SlBES7突变检测 | 第49-54页 |
| 3.5.2 SlHD-ZIP6500突变检测 | 第54-56页 |
| 3.6 讨论 | 第56-59页 |
| 4 利用HDR对SlCNR精准突变 | 第59-67页 |
| 4.1 设计供体DNA序列 | 第59-61页 |
| 4.2扩增HB1/HB2/MS1/MS2 | 第61-62页 |
| 4.3 CNRgRNAs-HB1-MS1-MS2-HB2-cas9-NPTⅡ及CNRgRNAs-HB1-MS1-MS2-HB2-cas9-NPTⅡ-P19m载体构建 | 第62-64页 |
| 4.4 SlCNR的定向突变检测 | 第64-65页 |
| 4.5 讨论 | 第65-67页 |
| 5 CPMV-HT增强的CRISPR/Cas9系统载体构建 | 第67-71页 |
| 5.1 扩增CPMVRNA-2UTR片段并驯化 | 第67-68页 |
| 5.2 将CPMVRNA-2UTR片段构建在Cas9两端 | 第68-69页 |
| 5.3 构建pDGB3Ω2-U6-PDS-gRNAs-CPMV-cas9 | 第69-70页 |
| 5.4 构建level1终载体 | 第70页 |
| 5.5 讨论 | 第70-71页 |
| 6 结论与展望 | 第71-73页 |
| 6.1 主要结论 | 第71页 |
| 6.2 后续工作及展望 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 附录 | 第81页 |
| A作者在攻读硕士学位期间所发表的文章目录 | 第81页 |
