| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略语 | 第13-19页 |
| 第一部分 ARHI基因再表达对BGC823胃癌细胞生物学行为的影响及机制研究 | 第19-51页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-27页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 多种细胞系中ARHI转录、翻译水平的检测 | 第21-23页 |
| 2.2.2 稳定再表达ARHI基因胃癌细胞株ARHI-BGC823的建立 | 第23-24页 |
| 2.2.3 稳定高表达ARHI基因胃癌细胞株ARHI-BGC823的鉴定 | 第24页 |
| 2.2.4 ARHI基因过表达对胃癌细胞BGC823生物学行为的影响 | 第24-25页 |
| 2.2.5 ARHI基因对BGC823胃癌细胞系调控机制的探索 | 第25-26页 |
| 2.3 统计学方法 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-47页 |
| 3.1 正常胃粘膜上皮细胞及胃癌细胞系中ARHI转录、翻译水平 | 第27-30页 |
| 3.1.1 正常胃粘膜上皮细胞及4种胃癌细胞系中ARHI转录水平 | 第27-28页 |
| 3.1.2 胃癌细胞系中ARHI蛋白表达水平 | 第28-29页 |
| 3.1.3 ARHI蛋白在正常胃粘膜上皮细胞及4种胃癌细胞中表达 | 第29-30页 |
| 3.2 稳定高表达ARHI基因胃癌细胞株ARHI-BGC823的建立 | 第30-32页 |
| 3.2.1 ARHI质粒、空载质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.2 ARHI质粒瞬时转染效率评价 | 第31-32页 |
| 3.2.3 稳定转染细胞系的建立 | 第32页 |
| 3.3 稳定高表达ARHI基因胃癌细胞株ARHI-BGC823的鉴定 | 第32-34页 |
| 3.3.1 稳定转染细胞系绿色荧光标签蛋白表达 | 第32-33页 |
| 3.3.2 稳定转染细胞系中ARHImRNA转录水平 | 第33页 |
| 3.3.3 稳定转染细胞系中ARHI蛋白表达水平 | 第33-34页 |
| 3.3.4 稳定转染细胞系中再表达ARHI蛋白的细胞内定位 | 第34页 |
| 3.4 体外实验评估ARHI基因对胃癌细胞BGC823生物学行为的影响 | 第34-42页 |
| 3.4.1 ARHI基因再表达可显著抑制胃癌细胞BGC823增殖活性 | 第34-36页 |
| 3.4.2 ARHI基因再表达可诱导胃癌细胞BGC823凋亡 | 第36-37页 |
| 3.4.3 ARHI再表达可诱导胃癌细胞的自噬 | 第37-39页 |
| 3.4.4 ARHI基因过表达可抑制BGC823胃癌细胞的迁移能力 | 第39-41页 |
| 3.4.5 ARHI基因过表达抑制胃癌细胞BGC823的侵袭能力 | 第41-42页 |
| 3.5 ARHI基因过表达影响胃癌细胞生物学行为的机制探讨 | 第42-47页 |
| 3.5.1 ARHI基因过表达诱导细胞周期G0/G1期阻滞 | 第42-43页 |
| 3.5.2 ARHI下调ERK信号通路活性抑制细胞增殖、诱导凋亡 | 第43-44页 |
| 3.5.3 ARHI再表达可能通过逆转EMT抑制细胞迁移、侵袭 | 第44-45页 |
| 3.5.4 ARHI再表达可能通过下调SP1/VEGF抑制胃癌细胞诱导血管生成的能力 | 第45页 |
| 3.5.5 ARHI可能通过下调PI3K-AKT-mTOR通路活性抑制恶性行为 | 第45-46页 |
| 3.5.6 BGC823胃癌细胞ARHI失活的原因包括启动子甲基化和组蛋白去乙酰化 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 第二部分 ARHI基因再表达对BGC823胃癌细胞裸鼠皮下成瘤及血行播散转移的影响及机制研究 | 第51-67页 |
| 1 前言 | 第51-52页 |
| 2 材料和方法 | 第52-55页 |
| 2.1 实验动物与试剂 | 第52页 |
| 2.2 裸小鼠皮下荷瘤模型构建 | 第52-53页 |
| 2.2.1 裸鼠饲养 | 第52页 |
| 2.2.2 裸鼠皮下接种移植瘤 | 第52页 |
| 2.2.3 皮下移植瘤生长情况观察 | 第52页 |
| 2.2.4 qRT-PCR检测ARHI、p62mRNA在皮下移植瘤组织的表达水平 | 第52页 |
| 2.2.5 免疫组化法检测移植瘤组织中相关蛋白表达 | 第52-53页 |
| 2.3 裸小鼠血行播散转移模型构建 | 第53-54页 |
| 2.3.1 肿瘤细胞尾静脉接种 | 第53页 |
| 2.3.2 大体测量、取材、常规病理组织标本制备 | 第53页 |
| 2.3.3 组织形态学观察 | 第53-54页 |
| 2.3.4 肿瘤生长、转移相关生物标志物的检测分析 | 第54页 |
| 2.4 统计学分析方法 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-64页 |
| 3.1 ARHI基因再表达对皮下移植瘤生长的影响及机制研究 | 第55-61页 |
| 3.1.1 ARHI再表达显著抑制皮下移植瘤的生长 | 第55-57页 |
| 3.1.2 ARHI再表达显著上调皮下移植瘤癌细胞的自噬水平 | 第57-58页 |
| 3.1.3 ARHI再表达显著抑制皮下移植瘤癌细胞的增殖活性 | 第58-59页 |
| 3.1.4 ARHI再表达明显抑制皮下移植瘤微血管生成 | 第59页 |
| 3.1.5 ARHI再表达影响皮下移植瘤中p-AKT和α-Catenin的表达 | 第59-60页 |
| 3.1.6 ARHI再表达显著上调皮下移植瘤癌细胞MIIP的表达 | 第60-61页 |
| 3.2 ARHI再表达抑制血行播散胃癌细胞在肺、肝形成转移瘤的能力 | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 5 结论 | 第66-67页 |
| 第三部分 胃癌组织中ARHI、LC3B、p62表达与临床病理因素和预后的关系及意义 | 第67-79页 |
| 1 前言 | 第67-68页 |
| 2 材料和方法 | 第68-70页 |
| 2.1 临床病理资料 | 第68页 |
| 2.1.1 临床标本收集 | 第68页 |
| 2.2.2 临床病理资料 | 第68页 |
| 2.2 免疫组织化学染色评价ARHI、p62、LC3B蛋白表达水平 | 第68-69页 |
| 2.2.1 组织芯片的构建 | 第68页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第68-69页 |
| 2.2.3 免疫组织化学染色与结果判定 | 第69页 |
| 2.3 统计学分析 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-76页 |
| 3.1 ARHI、p62、LC3B蛋白在正常胃粘膜和胃癌组织中的表达 | 第70-71页 |
| 3.2 ARHI、p62、LC3B蛋白表达的的相关性 | 第71-72页 |
| 3.3 ARHI、p62、LC3B蛋白表达与胃癌临床病理因素的相关性 | 第72页 |
| 3.4 ARHI、p62、LC3B蛋白表达与患者预后的关系 | 第72-76页 |
| 4 讨论 | 第76-78页 |
| 5 结论 | 第78-79页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 综述 | 第88-99页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 个人简历 | 第101页 |
