| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-18页 |
| ·细小病毒的简介 | 第11-12页 |
| ·博卡病毒简介 | 第12-14页 |
| ·人博卡病毒的发现、命名和分类 | 第12页 |
| ·人博卡病毒基因组分子学特征及临床表现 | 第12-13页 |
| ·HBoV的流行病学与诊断 | 第13-14页 |
| ·PEGFP真核表达系统及PET原核表达系统 | 第14-16页 |
| ·pEGFP真核表达载体简介 | 第14-15页 |
| ·pET原核表达系统简介 | 第15-16页 |
| ·本课题的目的及意义 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料 | 第18-22页 |
| ·主要仪器和实验材料 | 第18-19页 |
| ·仪器与设备 | 第18页 |
| ·实验所需的菌株、质粒和细胞 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| ·常用培养基及溶液配置 | 第19-22页 |
| ·细菌培养基 | 第19页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所需溶液 | 第19页 |
| ·碱裂法提质粒所需溶液 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE电泳所需溶液 | 第19-20页 |
| ·Western blot相关溶液配制 | 第20-21页 |
| ·实验所需的各种抗生素 | 第21页 |
| ·培养细胞常用溶液配制 | 第21-22页 |
| 第三章 实验方法 | 第22-27页 |
| ·人博卡病毒(HBoV)结构蛋白基因VP1抗原表位区域(4160-4480 NT)的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备 | 第22-24页 |
| ·引物设计与合成 | 第22页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第22页 |
| ·诱导并表达融合蛋白 | 第22-23页 |
| ·SDS-PAGE检测和蛋白诱导表达条件的筛选 | 第23页 |
| ·Western-Blot鉴定融合蛋白 | 第23页 |
| ·融合蛋白GST-VP1截短的切胶纯化 | 第23-24页 |
| ·多克隆抗体的制备以及Western-Blot分析 | 第24页 |
| ·人博卡病毒(HBoV)结构蛋白基因VP1、VP2以及非结构蛋白NS1的细胞内定位 | 第24-25页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组质粒转染293T细胞以及荧光显微镜观察 | 第25页 |
| ·人博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NP1引起HELA细胞凋亡的研究 | 第25-27页 |
| ·重组质粒pEGFP-NP1转染HeLa细胞以及DAPI染色观察 | 第25页 |
| ·重组质粒pEGFP-NP1转染HeLa细胞以及Caspase3活性检测 | 第25-27页 |
| 第四章 实验结果 | 第27-37页 |
| ·人博卡病毒(HBoV)结构蛋白基因VP1抗原表位区域的克隆、原核表达以及多克隆抗体的制备 | 第27-31页 |
| ·PCR扩增目的片段VP1抗原表位区域 | 第27页 |
| ·重组表达载体pET-49b-VP截短的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| ·融合蛋白GST-VP1截短的诱导表达及诱导条件的优化 | 第28-29页 |
| ·融合蛋白GST-VP1截短的纯化 | 第29-30页 |
| ·多克隆抗体的特异性分析 | 第30-31页 |
| ·人博卡病毒(HBoV)结构蛋白基因VP1、VP2以及非结构蛋白NS1的细胞内定位 | 第31-34页 |
| ·PCR扩增结构蛋白基因VP1、VP2与非结构蛋白基因NS1 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体pEGFP-VP1、pEGFP-VP2、pEGFP-NS1的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组载体转染293T细胞及利用荧光显微镜的观察 | 第33-34页 |
| ·人博卡病毒(HBoV)非结构蛋白NP1引起HELA细胞凋亡的研究 | 第34-37页 |
| ·重组质粒pEGFP-NP1转染HeLa细胞以及DAPI染色观察 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pEGFP-NP1转染HeLa细胞以及Caspase3活性检测 | 第35-37页 |
| 第五章 讨论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-43页 |
| 硕士期间发表论文 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
