| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 潜根线虫的概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 潜根线虫的生物学特性 | 第10-11页 |
| 1.1.2 潜根线虫及其危害 | 第11-12页 |
| 1.2 植物寄生线虫效应子在线虫寄生过程中的重要作用 | 第12-13页 |
| 1.2.1 降解或修饰植物细胞壁 | 第12页 |
| 1.2.2 调节植物免疫防御 | 第12-13页 |
| 1.2.3 调控植物细胞发育 | 第13页 |
| 1.3 植物寄生线虫效应子的定位研究 | 第13-14页 |
| 1.3.1 食道腺细胞 | 第13-14页 |
| 1.3.2 头感器 | 第14页 |
| 1.3.3 皮下组织 | 第14页 |
| 1.3.4 其他 | 第14页 |
| 1.4 线虫β-1,4-内切葡聚糖酶的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4.1 eng及其序列特征 | 第14-15页 |
| 1.4.2 β-1,4-内切葡聚糖酶的蛋白序列特征 | 第15-16页 |
| 1.4.3 eng基因表达分析 | 第16页 |
| 1.5 本研究的目的及内容 | 第16-18页 |
| 1.5.1 课题来源 | 第16页 |
| 1.5.2 研究目的 | 第16-17页 |
| 1.5.3 研究内容 | 第17页 |
| 1.5.4 研究技术路线 | 第17-18页 |
| 第二章 尖细潜根线虫的转录组数据分析 | 第18-26页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 转录组数据 | 第18页 |
| 2.2 方法 | 第18-20页 |
| 2.2.1 测序数据质量分析 | 第18页 |
| 2.2.2 参考序列(ref)比对 | 第18-19页 |
| 2.2.3 基因表达水平统计分析 | 第19页 |
| 2.2.4 差异表达基因(DEG)的分析 | 第19页 |
| 2.2.5 差异基因GO富集分析 | 第19页 |
| 2.2.6 差异基因KEGG富集分析 | 第19-20页 |
| 2.3 实验结果 | 第20-24页 |
| 2.3.1 测序数据质量结果 | 第20页 |
| 2.3.2 ref比对结果 | 第20-21页 |
| 2.3.3 基因表达水平 | 第21页 |
| 2.3.4 DEGs统计 | 第21-22页 |
| 2.3.5 差异基因GO富集分析 | 第22-24页 |
| 2.3.6 差异基因KEGG富集分析 | 第24页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 尖细潜根线虫Hm-eng-1基因的克隆与序列分析 | 第26-34页 |
| 3.1 材料 | 第26页 |
| 3.1.1 载体及菌株 | 第26页 |
| 3.1.2 引物 | 第26页 |
| 3.2 方法 | 第26-29页 |
| 3.2.1 潜根线虫的收集 | 第26-27页 |
| 3.2.2 潜根线虫总RNA的提取 | 第27页 |
| 3.2.3 cDNA第一条链的合成 | 第27页 |
| 3.2.4 Hm-eng-1基因cDNA全长的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2.4.1 第一次PCR | 第27-28页 |
| 3.2.4.2 第二次PCR | 第28页 |
| 3.2.5 克隆测序 | 第28-29页 |
| 3.2.5.1 PCR产物回收纯化 | 第28页 |
| 3.2.5.2 连接产物的转化 | 第28页 |
| 3.2.5.3 单菌落PCR筛选阳性克隆 | 第28-29页 |
| 3.2.5.4 测序与保种 | 第29页 |
| 3.3 结果与分析 | 第29-32页 |
| 3.3.1 RNA提取结果 | 第29-30页 |
| 3.3.2 Hm-eng-1基因的扩增 | 第30页 |
| 3.3.3 Hm-eng-1基因克隆载体阳性鉴定 | 第30页 |
| 3.3.4 Hm-eng-1基因的序列分析 | 第30-31页 |
| 3.3.5 ENG蛋白的系谱分析 | 第31-32页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 尖细潜根线虫Hm-eng-1基因的表达定位研究 | 第34-39页 |
| 4.1 材料 | 第34页 |
| 4.1.1 引物 | 第34页 |
| 4.2 方法 | 第34-37页 |
| 4.2.1 潜根线虫的收集 | 第34页 |
| 4.2.2 探针合成 | 第34-36页 |
| 4.2.2.1 重组质粒的提取 | 第34页 |
| 4.2.2.2 第一轮PCR | 第34-35页 |
| 4.2.2.3 PCR产物回收纯化 | 第35页 |
| 4.2.2.4 第二轮PCR | 第35-36页 |
| 4.2.3 原位杂交 | 第36-37页 |
| 4.2.3.1 线虫的固定 | 第36页 |
| 4.2.3.2 杂交前处理 | 第36页 |
| 4.2.3.3 预杂交、杂交 | 第36页 |
| 4.2.3.4 杂交后处理 | 第36-37页 |
| 4.2.3.5 显色与观察 | 第37页 |
| 4.3 结果与分析 | 第37-38页 |
| 4.3.1 探针合成 | 第37页 |
| 4.3.2 原位杂交结果 | 第37-38页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第38-39页 |
| 第五章 尖细潜根线虫Hm-eng-1基因的原核表达 | 第39-45页 |
| 5.1 材料 | 第39页 |
| 5.1.1 载体及菌株 | 第39页 |
| 5.1.2 引物 | 第39页 |
| 5.2 方法 | 第39-42页 |
| 5.2.1 表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 5.2.1.1 提取重组质粒 | 第39页 |
| 5.2.1.2 Hm-eng-1基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 5.2.1.3 PCR产物回收纯化 | 第40页 |
| 5.2.1.4 目的片段与原核表达载体连接与转化 | 第40页 |
| 5.2.1.5 单菌落PCR筛选阳性克隆 | 第40页 |
| 5.2.1.6 测序与保种 | 第40页 |
| 5.2.2 Hm-eng-1基因的表达 | 第40-41页 |
| 5.2.2.1 提取重组表达载体质粒 | 第40页 |
| 5.2.2.2 转化感受态细胞 | 第40页 |
| 5.2.2.3 Hm-eng-1基因的诱导表达 | 第40-41页 |
| 5.2.3 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第41-42页 |
| 5.2.3.1 制胶 | 第41页 |
| 5.2.3.2 上样 | 第41页 |
| 5.2.3.3 电泳 | 第41页 |
| 5.2.3.4 染色、脱色 | 第41-42页 |
| 5.2.3.5 检测 | 第42页 |
| 5.2.4 重组蛋白的Westernblot | 第42页 |
| 5.2.4.1 SDS-PAGE电泳 | 第42页 |
| 5.2.4.2 转膜 | 第42页 |
| 5.2.4.3 封闭 | 第42页 |
| 5.2.4.4 抗体孵育 | 第42页 |
| 5.2.4.5 发光液显色 | 第42页 |
| 5.2.4.6 检测与保存 | 第42页 |
| 5.3 结果分析 | 第42-43页 |
| 5.3.1 原核表达载体构建pEASY-BluntE1-Hm-eng-1的构建 | 第42-43页 |
| 5.3.2 重组表达载体的诱导表达 | 第43页 |
| 5.4 结论与讨论 | 第43-45页 |
| 第六章 RNAi技术分析尖细潜根线虫Hm-eng-1基因功能 | 第45-52页 |
| 6.1 材料 | 第45-46页 |
| 6.1.1 载体及菌株 | 第45页 |
| 6.1.2 引物 | 第45-46页 |
| 6.2 方法 | 第46-49页 |
| 6.2.1 入门载体的构建 | 第46-47页 |
| 6.2.1.1 提取重组质粒、pGWC入门载体质粒 | 第46页 |
| 6.2.1.2 Hm-eng-1基因的PCR扩增 | 第46页 |
| 6.2.1.3 pGWC入门载体的酶切 | 第46页 |
| 6.2.1.4 PCR产物与酶切产物回收纯化 | 第46页 |
| 6.2.1.5 目的片段与入门载体连接与转化 | 第46-47页 |
| 6.2.1.6 单菌落PCR筛选阳性克隆 | 第47页 |
| 6.2.1.7 测序与保种 | 第47页 |
| 6.2.2 RNAi载体的构建 | 第47页 |
| 6.2.2.1 提取pB7G干扰载体质粒 | 第47页 |
| 6.2.2.2 LR反应构建RNAi载体 | 第47页 |
| 6.2.2.3 单菌落PCR筛选阳性克隆 | 第47页 |
| 6.2.2.4 测序与保种 | 第47页 |
| 6.2.3 农杆菌转染水稻 | 第47-49页 |
| 6.2.3.1 制备感受态农杆菌GV3101 | 第47-48页 |
| 6.2.3.2 冻融法转化农杆菌及阳性转化检测 | 第48页 |
| 6.2.3.3 农杆菌介导转染水稻 | 第48-49页 |
| 6.2.3.4 转基因水稻植株的鉴定 | 第49页 |
| 6.3 结果分析 | 第49-51页 |
| 6.3.1 RNAi载体的构建 | 第49-50页 |
| 6.3.2 重组干扰载体pB7G-Hm-eng-1转化GV3101 | 第50页 |
| 6.3.3 PCR法检测转基因水稻植株 | 第50-51页 |
| 6.3.4 快速试纸条法检测转基因水稻植株 | 第51页 |
| 6.4 结论与讨论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 附录 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
