| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1 烟草病毒病现状及其防治 | 第10-11页 |
| 2 植物基因沉默 | 第11-15页 |
| ·植物基因沉默的作用机制 | 第12-15页 |
| ·转录水平基因沉默(TGS)机制 | 第12-13页 |
| ·转录后水平的基因沉默(PTGS)的机制 | 第13-15页 |
| 3 转录后水平的基因沉默(PTGS)在防治烟草病毒病上的研究与应用 | 第15-17页 |
| 4 目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 中国番茄黄化曲叶病毒CP基因片段反向重复表达载体的构建 | 第18-44页 |
| 1 试验材料 | 第18-19页 |
| ·质粒、菌株 | 第18页 |
| ·化学试剂及酶 | 第18页 |
| ·选用的抗生素 | 第18页 |
| ·PCR引物 | 第18-19页 |
| ·常用试剂的配制方法 | 第19页 |
| 2 试验方法 | 第19-32页 |
| ·DNA分子克隆常规操作技术 | 第20-30页 |
| ·PCR反应 | 第20页 |
| ·PCR反应体系 | 第20-21页 |
| ·DNA的酶切反应体系 | 第21页 |
| ·DNA样品的快速纯化回收 | 第21-23页 |
| ·载体去磷酸化体系 | 第23页 |
| ·DNA片段的连接 | 第23-25页 |
| ·感受态细胞制备方法 | 第25-26页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第27-30页 |
| ·pBin19质粒载体的改造 | 第30-31页 |
| ·反向重复真核表达载体构建 | 第31-32页 |
| ·CP片段的反向重复真核表达载体构建过程 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-42页 |
| ·pBin19载体的改造 | 第32-36页 |
| ·改RolC片段的克隆 | 第32-34页 |
| ·改RolC片段与pBin19载体的克隆 | 第34-36页 |
| ·CP基因片段的克隆与反向重复真核表达载体的构建 | 第36-42页 |
| ·CP片段的克隆 | 第36-37页 |
| ·CP基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·CP片段反向重复真核表达载体的克隆 | 第38-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·中间序列的使用和选择 | 第42页 |
| ·反向重复真核表达载体构建 | 第42-44页 |
| 第三章 dsRNA干扰载体转化烟草及其PCR验证 | 第44-57页 |
| 1 试验材料 | 第44-46页 |
| ·菌株及载体 | 第44页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| ·植物培养基 | 第44-45页 |
| ·LB培养基 | 第45页 |
| ·YEP培养基 | 第45页 |
| ·试验试剂 | 第45-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-51页 |
| ·根癌农杆菌的准备 | 第46页 |
| ·农杆菌LBA4404的感受态的制备 | 第46页 |
| ·电击转化农杆菌LBA4404 | 第46页 |
| ·烟草遗传转化体系的建立 | 第46-49页 |
| ·N.benthamiana无菌烟叶的获得 | 第46-47页 |
| ·抗生素浓度的确定 | 第47-48页 |
| ·根癌农杆菌的制备 | 第48页 |
| ·受体材料预培养 | 第48页 |
| ·农杆菌浸染 | 第48页 |
| ·共培养 | 第48-49页 |
| ·脱菌及选择培养 | 第49页 |
| ·生根培养 | 第49页 |
| ·转基因植株的炼苗和移栽 | 第49页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第49-51页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·转基因烟草中目的CP基因的PCR检测 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-57页 |
| ·抗生素临界值的确定 | 第51-53页 |
| ·卡那霉素对非转化烟草叶片生长分化的浓度的确定 | 第51-52页 |
| ·头孢霉素的确定 | 第52页 |
| ·卡那霉素对转化烟草生根的浓度的确定 | 第52-53页 |
| ·转基因烟草再生苗的获得 | 第53-54页 |
| ·转化烟草的PCR检测 | 第54-55页 |
| ·转基因烟草再生苗总DNA的提取和PCR检测 | 第55-57页 |
| ·总DNA的提取 | 第55页 |
| ·总DNA的PCR检测 | 第55-57页 |
| 第四章 结语 | 第57-59页 |
| 1 研究特色及创新点 | 第57页 |
| 2 小结 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附录A 培养基配方及常用缓冲液 | 第63-67页 |
| 附录B 本论文所用重要缩写词及中文对照 | 第67-69页 |
| 附录C 常用化学试剂、分子生物学试剂、组培实验试剂及仪器 | 第69-71页 |
| 附录D 测序结果 | 第71-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
