| 摘要 | 第6-10页 |
| ABSTRACT | 第10-15页 |
| 缩略词表 | 第16-17页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 第一部分 ：PDLIM5在前列腺癌相关芯片数据库中表达分析及组织标本验证.. | 第20-32页 |
| 一、数据收集及实验方法与实验材料 | 第20-24页 |
| (一)ONCOMINE数据库资料筛选与摘录方法 | 第20页 |
| (二)PROGGENE数据库数据摘录 | 第20页 |
| (三)前列腺癌组织标本收集与临床病理信息采集方法 | 第20-21页 |
| (四)免疫组化实验材料及染色方法 | 第21-23页 |
| (五)数据统计及作图方法 | 第23-24页 |
| 二、实验结果 | 第24-32页 |
| (一)数据库中PDLIM5在前列腺癌及正常腺体组织中差异表达情况 | 第24-25页 |
| (二)免疫组化方法在组织标本中验证PDLIM5在前列腺癌及正常腺体组织中差异表达 | 第25-26页 |
| (三)数据库资料提示PDLIM5异常高表达与前列腺癌不良预后相关 | 第26-29页 |
| (四)PDLIM5为前列腺癌生化复发的独立危险因素 | 第29-32页 |
| 第二部分 ：前列腺癌PDLIM5敲减细胞株筛选及构建与沉默效率验证 | 第32-41页 |
| 一、材料与方法 | 第32-38页 |
| (一)实验主要材料 | 第32页 |
| (二)细胞培养方法 | 第32页 |
| (三)敲减PDLIM5前列腺癌细胞株的选择与构建 | 第32-35页 |
| (四)在前列腺癌细胞株中敲减PDLIM5效率检测 | 第35-38页 |
| (五)统计学方法 | 第38页 |
| 二、实验结果 | 第38-41页 |
| (一)各前列腺细胞株中PDLIM5蛋白及MRNA表达水平 | 第38-39页 |
| (二)慢病毒转染效率检测及荧光拍照 | 第39-40页 |
| (三)前列腺癌细胞株中成功敲减PDLIM5表达 | 第40-41页 |
| 第三部分 ：检测PDLIM5沉默后前列腺癌细胞株增殖、细胞周期凋亡水平变化及对侵袭转移能力影响 | 第41-50页 |
| 一、实验方法及材料 | 第41-44页 |
| (一)细胞增殖实验(MTT法) | 第41页 |
| (二)克隆形成实验 | 第41-42页 |
| (三)流式细胞术检测细胞周期及凋亡 | 第42-43页 |
| (四)细胞划痕实验 | 第43页 |
| (五)TRANSWELL测定前列腺癌细胞迁移侵袭能力 | 第43-44页 |
| 二、实验结果 | 第44-50页 |
| (一)前列腺癌细胞系DU145和PC-3中沉默PDLIM5导致细胞增值和克隆形成能力下降 | 第44-45页 |
| (二)沉默PDLIM5在DU145和PC-3细胞中诱导G2/M阻滞和细胞凋亡.. | 第45-48页 |
| (三)敲减PDLIM5导致前列腺癌细胞株的迁移侵袭能力下降 | 第48-50页 |
| 第四部分 ：PDLIM5对前列腺癌增殖转移调控机制的初步探究 | 第50-60页 |
| 一、实验材料与实验方法 | 第50-53页 |
| (一)WESTERN BLOT实验 | 第50页 |
| (二)RT-QPCR实验 | 第50-51页 |
| (三)构建过表达PDLIM5的前列腺细胞株 | 第51-52页 |
| (四)免疫共沉淀(CO-IMMUNOPRECIPITATION) | 第52-53页 |
| 二、实验结果 | 第53-60页 |
| (一)沉默PDLIM5后逆转上皮间质化转化(EMT)表型 | 第53-55页 |
| (二)前列腺癌细胞株中过表达PDLIM5慢病毒感染及效率检测 | 第55-56页 |
| (三)过表达PDLIM5后促EMT及骨转移相关分子表达量上升 | 第56-57页 |
| (四)PDLIM5可以直接与AMPK蛋白相互作用以维持其活化并减少AMPK降解 | 第57-60页 |
| 第五部分 ：动物实验研究PDLIM5在体内功能作用 | 第60-63页 |
| 一、材料与方法材料 | 第60-61页 |
| (一)裸鼠成瘤实验 | 第60页 |
| (二)成瘤瘤体组织蛋白检测 | 第60-61页 |
| 二、实验结果 | 第61-63页 |
| (一)裸鼠成瘤实验模型结果提示沉默PDLIM5后DU145细胞在体内成瘤能力受抑制 | 第61-62页 |
| (二)体内实验提示敲减PDLIM5后通过影响体内AMPK及EMT通路抑制肿瘤细胞增殖转移 | 第62-63页 |
| 讨论 | 第63-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 后续研究计划 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 综述 | 第76-86页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 研究生期间发表论文及科研情况 | 第86-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
