| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-16页 |
| 1 抗肿瘤免疫治疗是肝癌治疗的新热点 | 第10-11页 |
| 2 IFNs治疗癌症的机制 | 第11-14页 |
| 2.1 IFNs抑制肿瘤细胞增殖 | 第12-13页 |
| 2.2 IFNs促进肿瘤细胞凋亡 | 第13页 |
| 2.3 IFNs抑制肿瘤血管生成 | 第13页 |
| 2.4 IFNs的抗肿瘤免疫反应作用 | 第13-14页 |
| 3 IFNα诱导肝脏细胞CMPK2高表达 | 第14-15页 |
| 4 研究目的:从细胞层面探究CMPK2对肝癌细胞的作用 | 第15-16页 |
| 实验材料 | 第16-18页 |
| 1 细胞系、菌株和质粒 | 第16页 |
| 2 抗体 | 第16页 |
| 3 限制性内切酶和其他修饰酶 | 第16页 |
| 4 其他主要试剂 | 第16-17页 |
| 5 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 实验方法 | 第18-31页 |
| 1 细胞培养,传代、冻存及复苏 | 第18页 |
| 2 慢病毒表达质粒的构建 | 第18-22页 |
| 2.1 DNA酶切 | 第18-20页 |
| 2.2 PCR产物纯化 | 第20页 |
| 2.3 DNA连接 | 第20-21页 |
| 2.4 质粒转化,提取和纯化 | 第21-22页 |
| 3 慢病毒的包装和感染 | 第22-24页 |
| 3.1 细胞转染 | 第22-23页 |
| 3.2 慢病毒的收获及浓缩 | 第23页 |
| 3.3 慢病毒滴度测定 | 第23-24页 |
| 3.4 感染Huh7细胞 | 第24页 |
| 4 实时定量PCR (Real-time PCR) | 第24-27页 |
| 4.1 TRIZOL法提取RNA | 第24-25页 |
| 4.2 逆转录RNA | 第25页 |
| 4.3 Real-time PCR | 第25-27页 |
| 5 组织总蛋白提取和浓度测定 | 第27页 |
| 5.1 组织蛋白提取 | 第27页 |
| 5.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第27页 |
| 6 蛋白免疫印记(Western blot) | 第27-30页 |
| 6.1 Western blot所用的各种溶液 | 第27-28页 |
| 6.2 聚丙烯酰胺凝胶制备 | 第28页 |
| 6.3 样品的制备、上样和电泳 | 第28-29页 |
| 6.4 转膜 | 第29页 |
| 6.5 抗原抗体反应 | 第29页 |
| 6.6 辣根过氧化物酶化学发光法检测蛋白(ECL反应) | 第29-30页 |
| 7 MitoSOX Red染色检测线粒体中超氧化物水平 | 第30页 |
| 8 CellTiter-Glo ATP荧光检测 | 第30页 |
| 9 统计学分析 | 第30-31页 |
| 实验结果 | 第31-39页 |
| 1 CMPK2在不同刺激处理下不同细胞中的表达情况 | 第31-33页 |
| 1.1 IFNα处理后Huh7细胞CMPK2表达增加最显著 | 第31-32页 |
| 1.2 IFNα诱导Huh7细胞CMPK2表达的时间和浓度效应 | 第32-33页 |
| 2 成功构建稳定过表达CMPK2的Huh7细胞 | 第33-34页 |
| 3 CMPK2可能不影响Huh7细胞的增殖和氧化应激状态 | 第34-36页 |
| 3.1 CMPK2可能不影响Huh7细胞的增殖 | 第34-35页 |
| 3.2 CMPK2可能不影响Huh7细胞的氧化应激状态 | 第35-36页 |
| 4 Huh7细胞中CMPK2的高表达促进巨噬细胞的激活 | 第36-38页 |
| 4.1 CMPK2上调Huh7细胞及其上清中的ATP水平 | 第36-37页 |
| 4.2 稳定过表达CMPK2的Huh7细胞上清上调巨噬细胞中炎性因子的表达 | 第37-38页 |
| 5 人肝癌组织与癌旁组织中CMPK2水平均低水平表达 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39-43页 |
| 1 本研究概述 | 第39页 |
| 2 STAT1的磷酸化可能促进CMPK2的转录激活 | 第39-40页 |
| 3 IFNα上调肝癌细胞CMPK2表达激活巨噬细胞 | 第40-41页 |
| 3.1 CMPK2上调Huh7细胞及其上清中ATP水平 | 第40页 |
| 3.2 CMPK2可能通过上调ATP水平促进巨噬细胞中炎性因子的表达 | 第40-41页 |
| 3.3 CMPK2可能促进抗肿瘤免疫反应 | 第41页 |
| 4 本研究的不足 | 第41-42页 |
| 4.1 IFNα上调CMPK2的具体机制还需进一步实验验证 | 第41-42页 |
| 4.2 CMPK2的高表达激活巨噬细胞的具体机制还需进一步阐明 | 第42页 |
| 5 展望:全面认识CMPK2介导的抗肿瘤免疫作用 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 英文名词缩写及中文对照 | 第48-50页 |
| 文献综述 | 第50-72页 |
| References | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 个人简历 | 第73-74页 |
