| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第18-39页 |
| 1.1 松材线虫简介 | 第18-23页 |
| 1.1.1 分类地位及形态特征 | 第18页 |
| 1.1.2 松材线虫病史及发展 | 第18-19页 |
| 1.1.3 寄主范围及危害特点 | 第19页 |
| 1.1.4 松材线虫的生活史 | 第19-20页 |
| 1.1.5 松材线虫致病机理研究 | 第20-21页 |
| 1.1.6 松材线虫病的防治方法 | 第21-23页 |
| 1.2 模式线虫抗性相关基因研究进展 | 第23-29页 |
| 1.2.1 先天性免疫系统研究进展 | 第24-26页 |
| 1.2.2 抗药性相关基因研究进展 | 第26-28页 |
| 1.2.3 抗环境刺激相关基因研究进展及其它信号路径研究 | 第28-29页 |
| 1.3 线虫转录组学研究进展 | 第29-32页 |
| 1.3.1 转录组学简介 | 第29-30页 |
| 1.3.2 目前转录组测序的主要技术平台 | 第30页 |
| 1.3.3 植物寄生线虫转录组学研究进展 | 第30-31页 |
| 1.3.4 松材线虫后基因组学研究进展 | 第31-32页 |
| 1.4 植物寄生线虫原位杂交研究进展 | 第32-34页 |
| 1.4.1 原位杂交简介 | 第32页 |
| 1.4.2 原位杂交在植物寄生线虫研究上的应用 | 第32-33页 |
| 1.4.3 原位杂交在松材线虫研究上的应用 | 第33-34页 |
| 1.5 植物寄生线虫RNAi研究进展 | 第34-37页 |
| 1.5.1 RNAi简介 | 第34页 |
| 1.5.2 RNAi作用机理 | 第34-35页 |
| 1.5.3 植物寄生线虫RNAi的研究与应用 | 第35-37页 |
| 1.6 本论文的研究目的及意义 | 第37-39页 |
| 2 药剂处理松材线虫转录组分析 | 第39-68页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 2.1.1 供试线虫 | 第39页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第39-40页 |
| 2.2 研究方法 | 第40-45页 |
| 2.2.1 松材线虫的处理 | 第40页 |
| 2.2.2 松材线虫总RNA提取及检测 | 第40-41页 |
| 2.2.3 文库的构建及上机测序 | 第41页 |
| 2.2.4 生物信息学分析 | 第41-45页 |
| 2.3 结果与分析 | 第45-67页 |
| 2.3.1 松材线虫总RNA提取及消化 | 第45-47页 |
| 2.3.2 松材线虫转录组数据及其质量控制 | 第47-50页 |
| 2.3.3 转录组数据比对及文库质量评估 | 第50页 |
| 2.3.4 序列结构分析 | 第50-52页 |
| 2.3.5 基因表达量分析 | 第52-54页 |
| 2.3.6 差异表达分析 | 第54-65页 |
| 2.3.7 新基因分析 | 第65-67页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第67-68页 |
| 3 松材线虫IIS相关基因的克隆与基因分析 | 第68-110页 |
| 3.1 试验材料 | 第68-69页 |
| 3.1.1 供试线虫 | 第68页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第68-69页 |
| 3.2 主要方法 | 第69-72页 |
| 3.2.1 松材线虫的洗虫处理 | 第69页 |
| 3.2.2 松材线虫总RNA提取及检测 | 第69页 |
| 3.2.3 第一链cDNA合成 | 第69-70页 |
| 3.2.4 目的基因CDS克隆 | 第70页 |
| 3.2.5 扩增片段的纯化 | 第70-71页 |
| 3.2.6 PCR扩增产物的连接、转化 | 第71页 |
| 3.2.7 菌落PCR检测 | 第71页 |
| 3.2.8 生物信息学分析 | 第71-72页 |
| 3.3 结果与分析 | 第72-108页 |
| 3.3.1 松材线虫RNA质量 | 第72页 |
| 3.3.2 松材线虫Daf-16、Age-1、Akt、Sgk-1基因的CDS克隆 | 第72-73页 |
| 3.3.3 BxDaf-16、BxAge-1、BxAkt及BxSgk-1基因特性分析 | 第73-108页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第108-110页 |
| 4 松材线虫IIS路径四个基因的表达分析 | 第110-130页 |
| 4.1 试验材料 | 第110-111页 |
| 4.1.1 供试线虫 | 第110页 |
| 4.1.2 主要试剂及酶类 | 第110页 |
| 4.1.3 杂交相关溶液配制 | 第110-111页 |
| 4.1.4 qPCR相关药剂配制 | 第111页 |
| 4.2 主要方法 | 第111-115页 |
| 4.2.1 杂交试验的主要方法 | 第111-114页 |
| 4.2.2 qPCR试验的主要方法 | 第114-115页 |
| 4.3 结果与分析 | 第115-128页 |
| 4.3.1 原位杂交试验结果与分析 | 第115-119页 |
| 4.3.2 qPCR试验结果与分析 | 第119-128页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第128-130页 |
| 4.4.1 杂交试验小结与分析 | 第128-129页 |
| 4.4.2 qPCR试验小结与分析 | 第129-130页 |
| 5 松材线虫IIS路径四个基因的RNAi沉默分析 | 第130-146页 |
| 5.1 试验材料 | 第130页 |
| 5.1.1 供试线虫 | 第130页 |
| 5.1.2 主要试剂及仪器 | 第130页 |
| 5.2 主要方法 | 第130-135页 |
| 5.2.1 RNAi引物设计 | 第131页 |
| 5.2.2 RNA提取及cDNA合成 | 第131页 |
| 5.2.3 dsRNA合成 | 第131-134页 |
| 5.2.4 dsRNA处理线虫 | 第134页 |
| 5.2.5 qPCR定量检测试验 | 第134页 |
| 5.2.6 后续药剂处理试验 | 第134-135页 |
| 5.3 结果与分析 | 第135-145页 |
| 5.3.1 单链RNAi模板 | 第135页 |
| 5.3.2 dsRNA的合成 | 第135-136页 |
| 5.3.3 基因沉默效率分析 | 第136-137页 |
| 5.3.4 RNAi后基因转录水平分析 | 第137-138页 |
| 5.3.5 显微观察及表型分析 | 第138-140页 |
| 5.3.6 四个基因沉默处理后松材线虫对不同药剂的敏感性 | 第140-145页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第145-146页 |
| 6 松材线虫IIS路径四个基因的联合沉默分析 | 第146-166页 |
| 6.1 试验材料 | 第146页 |
| 6.1.1 供试线虫 | 第146页 |
| 6.1.2 主要试剂及仪器 | 第146页 |
| 6.2 主要方法 | 第146-147页 |
| 6.2.1 RNA提取及cDNA合成 | 第146页 |
| 6.2.2 dsRNA合成 | 第146-147页 |
| 6.2.3 dsRNA处理线虫 | 第147页 |
| 6.2.4 qPCR定量检测试验 | 第147页 |
| 6.2.5 后续药剂处理试验 | 第147页 |
| 6.3 结果与分析 | 第147-164页 |
| 6.3.1 基因共沉默后基因转录水平分析 | 第147-151页 |
| 6.3.2 基因共沉后表型观察及分析 | 第151-153页 |
| 6.3.3 基因共沉默后松材线虫对不同药剂的敏感性 | 第153-164页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第164-166页 |
| 6.4.1 基因共沉默效果检测及表型观察 | 第164页 |
| 6.4.2 基因共沉默后线虫对药剂胁迫的敏感性 | 第164页 |
| 6.4.3 存在的问题 | 第164-166页 |
| 结论 | 第166-168页 |
| 参考文献 | 第168-183页 |
| 附录 | 第183-184页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第184-185页 |
| 致谢 | 第185-187页 |
| 附件 | 第187-188页 |
