| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-42页 |
| 1.1 微生物降解纤维素的策略 | 第17-23页 |
| 1.1.1 非复合纤维素酶系 | 第18-19页 |
| 1.1.2 复合纤维小体酶系 | 第19-20页 |
| 1.1.3 细胞结合型非复合酶系 | 第20-21页 |
| 1.1.4 其他纤维素酶水解协同因子 | 第21-23页 |
| 1.2 C. hutchinsonii纤维素降解机制研究进展 | 第23-40页 |
| 1.2.1 C. hutchinsonii研究背景 | 第23-24页 |
| 1.2.2 C. hutchinsonii糖苷水解酶 | 第24-25页 |
| 1.2.3 C. hutchinsonii葡萄糖代谢 | 第25-28页 |
| 1.2.4 C. hutchinsoii糖转运相关蛋白 | 第28-31页 |
| 1.2.5 细菌环境响应的信号转导 | 第31-38页 |
| 1.2.6 纤维素降解细菌中ECF-σ因子研究进展 | 第38-40页 |
| 1.3 论文的立题依据和工作内容 | 第40-42页 |
| 第二章 C. hutchinsonii纤维素酶基因突变株构建及性质研究 | 第42-66页 |
| 2.1 材料方法 | 第43-54页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第43-44页 |
| 2.1.2 引物 | 第44页 |
| 2.1.3 主要试剂及仪器 | 第44-45页 |
| 2.1.4 培养条件 | 第45页 |
| 2.1.5 生物信息学分析 | 第45页 |
| 2.1.6 常规分子生物学方法 | 第45-53页 |
| 2.1.7 突变株生长测定 | 第53页 |
| 2.1.8 纤维素酶活力测定 | 第53-54页 |
| 2.2 结果与分析 | 第54-64页 |
| 2.2.1 C. hutchinsonii糖苷水解酶基因转录分析 | 第54-55页 |
| 2.2.2 纤维素酶CHU_1655,CHU_3811结构预测分析 | 第55-56页 |
| 2.2.3 纤维素酶CHU_1655,CHU_3811插入失活载体构建 | 第56-57页 |
| 2.2.4 突变株△1655及△3811验证及生长表型分析 | 第57-59页 |
| 2.2.5 突变株△3811菌体酶活分析 | 第59-61页 |
| 2.2.6 chu_3811基因的异源表达载体构建 | 第61-64页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 C. hutchinsonii非磷酸化葡萄糖代谢基因在纤维素降解过程中的作用 | 第66-87页 |
| 3.1 材料与方法 | 第67-71页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第67页 |
| 3.1.2 引物 | 第67-69页 |
| 3.1.3 主要试剂及仪器 | 第69页 |
| 3.1.4 常规分子生物学方法 | 第69页 |
| 3.1.5 纤维素吸附测定 | 第69-70页 |
| 3.1.6 葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第70-71页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第71-84页 |
| 3.2.1 葡萄糖/山梨酮脱氢酶编码基因chu_1221,chu_2315基因座位及功能预测 | 第71-73页 |
| 3.2.2 chu_1221,chu_2315插入失活载体构建 | 第73页 |
| 3.2.3 chu_1221,chu_2315插入失活突变株验证 | 第73-74页 |
| 3.2.4 chu_1221,chu_2315插入失活突变株生长表型 | 第74-75页 |
| 3.2.5 chu_1221,chu_2315插入失活突变株全菌体纤维素酶活分析 | 第75-76页 |
| 3.2.6 chu_1221,chu_2315插入失活突变株菌体对纤维素的吸附 | 第76-77页 |
| 3.2.7 chu_1221,chu_2315插入失活突变株外膜蛋白纤维素吸附差异分析 | 第77-78页 |
| 3.2.8 chu_1221,chu_2315单插入失活菌株外膜蛋白葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第78-79页 |
| 3.2.9 chu_1221,chu_2315催化结构域体外纯化与性质测定 | 第79-81页 |
| 3.2.10 C. hutchinsonii葡萄糖酸盐转运系统在纤维素降解中的作用 | 第81-84页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第84-87页 |
| 第四章 C. hutchinsonii类淀粉利用系统组分基因功能分析及纤维素利用缺陷型突变株的转座诱变筛选 | 第87-124页 |
| 4.1 材料与方法 | 第87-95页 |
| 4.1.1 菌种与质粒 | 第87-89页 |
| 4.1.2 引物 | 第89-90页 |
| 4.1.3 主要试剂及仪器 | 第90页 |
| 4.1.4 生物信息学分析和常规分子生物学方法 | 第90页 |
| 4.1.5 突变株鉴定 | 第90-93页 |
| 4.1.6 菌体分级分离 | 第93-94页 |
| 4.1.7 荧光定量PCR方法 | 第94页 |
| 4.1.8 菌体胞外蛋白提取 | 第94-95页 |
| 4.1.9 蛋白二级结构分析 | 第95页 |
| 4.2 结果与分析 | 第95-121页 |
| 4.2.1 susD-like基因chu_0547,chu_0554插入失活及性质分析 | 第95-99页 |
| 4.2.2 转座突变株筛选及性质测定 | 第99-109页 |
| 4.2.3 突变株MT2005表型分析 | 第109-114页 |
| 4.2.4 突变株MT2005转座位点分析及southern blot验证 | 第114页 |
| 4.2.5 MT2005转座插入位点的极性效应分析 | 第114-118页 |
| 4.2.6 突变株M5生长表型分析 | 第118-119页 |
| 4.2.7 突变株M5胞外分泌蛋白检测 | 第119-120页 |
| 4.2.8 CHU_2981异源表达及结构分析 | 第120-121页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第121-124页 |
| 第五章 C. hutchinsonii Sigma调节因子ChSR在纤维素利用过程中的功能研究 | 第124-150页 |
| 5.1 材料与方法 | 第124-130页 |
| 5.1.1 菌种与质粒 | 第124-127页 |
| 5.1.2 引物 | 第127-129页 |
| 5.1.3 主要仪器与药品及培养条件 | 第129页 |
| 5.1.4 常用分子生物学方法及生物信息学分析方法 | 第129页 |
| 5.1.5 菌体扩散及运动观察 | 第129-130页 |
| 5.1.6 滤纸吸附电镜观察 | 第130页 |
| 5.2 结果与分析 | 第130-147页 |
| 5.2.1 MT2007转座插入位点分析 | 第130-133页 |
| 5.2.2 chu_0195基因功能回补 | 第133-134页 |
| 5.2.3 回补菌株验证及表型分析 | 第134-137页 |
| 5.2.4 突变株菌落扩散及运动观察 | 第137页 |
| 5.2.5 突变株胞外蛋白提取及其纤维素吸附测定 | 第137-139页 |
| 5.2.6 突变株全菌体纤维素酶活测定 | 第139页 |
| 5.2.7 CHU_0193,CHU_0194,CHU_0195体内相互作用研究 | 第139-144页 |
| 5.2.8 SurA插入失活及表型分析 | 第144-147页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第147-150页 |
| 全文总结 | 第150-152页 |
| 参考文献 | 第152-163页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第163-164页 |
| 致谢 | 第164-165页 |
| 附件 | 第165页 |
