| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 基因天然反义链转录本研究现状 | 第12-16页 |
| 1.1.1 基因天然反义链转录本定义及分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 NATs的转录本特征 | 第13-14页 |
| 1.1.3 NATs的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.1.4 NATs调控正义链转录本的分子机制 | 第15-16页 |
| 1.2 家禽生长激素受体基因研究现状 | 第16-20页 |
| 1.2.1 家禽GHR基因结构分析 | 第16-17页 |
| 1.2.2 家禽生长与肝脏GHRmRNA表达呈正相关 | 第17-19页 |
| 1.2.3 GHR基因多态性与鸡生产性能相关 | 第19页 |
| 1.2.4 GHR基因多态性与性连锁矮小鸡 | 第19-20页 |
| 1.3 鸡GHR基因可双向转录,其反义链转录本GHR-AS可调控其正义链转录本(GHR-S)的表达 | 第20页 |
| 1.4 Let-7b可结合并调控鸡GHRmRNA | 第20-21页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 鸡GHR-S、GHR-AS和Let-7b表达特征分析 | 第22-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 试验动物及样品采集 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 鸡血液基因组DNA抽提 | 第23-24页 |
| 2.2.2 怀乡鸡肝细胞分离、培养 | 第24页 |
| 2.2.3 怀乡鸡肝细胞PAS染色 | 第24页 |
| 2.2.4 怀乡鸡肝细胞核、质RNA抽提 | 第24-25页 |
| 2.2.5 怀乡鸡肝组织总RNA抽提 | 第25-26页 |
| 2.2.6 怀乡鸡鸡肝组织、肝细胞核和质RNA反转录 | 第26页 |
| 2.2.7 目的基因PCR检测 | 第26-27页 |
| 2.2.8 PCR检测不同品种鸡GHR基因3′UTR缺失突变 | 第27页 |
| 2.2.9 怀乡鸡公鸡肝组织GHR-S、GHR-AS和Let-7b时序表达谱构建 | 第27-28页 |
| 2.2.10 怀乡鸡肝细胞GHR-S和GHR-AS亚细胞定位 | 第28页 |
| 2.2.11 利用放线菌素D分析鸡肝细胞GHR-S和GHR-AS半衰期 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.3.1 不同品种鸡GHR基因3′UTR缺失突变检测 | 第28-29页 |
| 2.3.2 鸡肝组织总RNA完整性分析 | 第29-30页 |
| 2.3.3 鸡肝组织GHR-S、GHR-AS和Let-7b的PCR检测结果 | 第30页 |
| 2.3.4 怀乡鸡公鸡肝组织GHR-S、GHR-AS和Let-7b时序表达模式分析 | 第30-32页 |
| 2.3.5 鸡肝细胞分离、培养及PAS染色后的形态观察 | 第32-33页 |
| 2.3.6 鸡肝细胞GHR-S和GHR-AS的亚细胞定位分析 | 第33-34页 |
| 2.3.7 鸡GHR-AS稳定性高于GHR-S | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-37页 |
| 2.4.1 PCR法可快速检测鸡GHR基因3′UTR缺失突变个体 | 第34-35页 |
| 2.4.2 鸡肝组织GHR-S、GHR-AS和Let-7b表达特征分析 | 第35页 |
| 2.4.3 鸡胚胎原代肝细胞分离、培养的技术要点 | 第35-36页 |
| 2.4.4 鸡胚胎肝细胞中GHR-S和GHR-AS表达特征分析 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 3 鸡GHR-AS对肝细胞增殖的影响 | 第38-47页 |
| 3.1 主要试验材料 | 第38页 |
| 3.1.1 试验动物及样品采集 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试验仪器 | 第38页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第38页 |
| 3.2 试验方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 鸡肝细胞中过表达GHR-AS | 第38-39页 |
| 3.2.2 鸡肝细胞中干扰GHR-AS | 第39页 |
| 3.2.3 Edu法检测鸡肝细胞增殖 | 第39页 |
| 3.2.4 CCK-8检测鸡肝细胞增殖 | 第39页 |
| 3.2.5 流式细胞术检测鸡肝细胞周期 | 第39-40页 |
| 3.3 试验结果 | 第40-43页 |
| 3.3.1 过表达GHR-AS促使GHR-S表达量升高 | 第40页 |
| 3.3.2 干扰GHR-AS降低GHR-S表达量 | 第40-41页 |
| 3.3.3 过表达或干扰GHR-AS对鸡肝细胞增殖影响的分析 | 第41-43页 |
| 3.3.4 过表达或干扰GHR-AS对鸡肝细胞周期影响的分析 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 3.4.1 脂质体转染法适用于原代肝细胞的DNA转染试验 | 第43-44页 |
| 3.4.2 GHR-AS调控GHR-S表达 | 第44-45页 |
| 3.4.3 GHR-AS影响鸡原代肝细胞增殖 | 第45-46页 |
| 3.5 小结 | 第46-47页 |
| 4 鸡GHR-AS与GHR-S形成双链RNA提高GHR-S稳定性 | 第47-61页 |
| 4.1 主要试验材料 | 第47页 |
| 4.1.1 试验动物及样品采集 | 第47页 |
| 4.1.2 主要试验仪器 | 第47页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第47页 |
| 4.2 试验方法 | 第47-51页 |
| 4.2.1 鸡肝细胞分离、培养 | 第47页 |
| 4.2.2 鸡肝组织总RNA抽提 | 第47页 |
| 4.2.3 鸡肝细胞核、质RNA抽提 | 第47-48页 |
| 4.2.4 除去RNA中的gDNA | 第48页 |
| 4.2.5 利用S1核酸酶分析鸡GHR-S和GHR-AS能否在GHR-S 3′UTR形成RNA双链 | 第48-49页 |
| 4.2.6 扩增产物测序及序列比对分析 | 第49页 |
| 4.2.7 构建鸡GHR-AS5′UTR过表达载体 | 第49-51页 |
| 4.2.8 过表达鸡GHR-AS或GHR-AS5′UTR | 第51页 |
| 4.2.9 利用放线菌素D分析鸡GHR-AS对GHR-S半衰期的影响 | 第51页 |
| 4.3 结果 | 第51-58页 |
| 4.3.1 gDNA污染检测 | 第51-52页 |
| 4.3.2 鸡GHR-S和GHR-AS在GHR-S3′UTR可形成RNA双链 | 第52-53页 |
| 4.3.3 鸡GHR-AS5′UTR过表达载体构建 | 第53-54页 |
| 4.3.4 过表达鸡GHR-AS提高GHR-S稳定性 | 第54-56页 |
| 4.3.5 鸡GHR-AS和Let-7b竞争调控GHR-S的表达水平 | 第56-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 4.4.1 鸡GHR-AS和GHR-S在GHR-S3′UTR可形成RNA双链 | 第58页 |
| 4.4.2 鸡GHR-AS与GHR-S形成RNA双链提高GHR-S稳定性 | 第58-59页 |
| 4.4.3 过表达鸡GHR-AS可以降低Let-7b对GHR-S的负调控作用,从而提高GHR-S稳定性 | 第59-60页 |
| 4.4.4 鸡GHR基因受到非编码分子调控,使GHR-S表达量处于动态平衡 | 第60页 |
| 4.5 小结 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 导师简介 | 第71页 |
