| 中文摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-10页 |
| 缩略词索引 | 第15-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 生物体衰老 | 第16-17页 |
| 1.1.1 个体衰老 | 第16-17页 |
| 1.1.2 细胞衰老 | 第17页 |
| 1.2 干细胞衰老 | 第17-20页 |
| 1.2.1 干细胞衰老模型的建立及评估 | 第18-19页 |
| 1.2.2 干细胞衰老相关指标的检测 | 第19-20页 |
| 1.2.3 干细胞衰老调控机制 | 第20页 |
| 1.3 干细胞的表观遗传学调控 | 第20-22页 |
| 1.3.1 DNA甲基化 | 第21页 |
| 1.3.2 组蛋白修饰 | 第21页 |
| 1.3.3 非编码RNA | 第21-22页 |
| 1.4 miR-34a对细胞衰老的调控作用 | 第22-24页 |
| 1.4.1 miR-34a与Txnrd | 第23页 |
| 1.4.2 miR-34a与CyclinD1、CDK4及CDK | 第23页 |
| 1.4.3 miR-34a与c-Myc | 第23页 |
| 1.4.4 miR-34a与Sirt | 第23页 |
| 1.4.5 miR-34a与Nampt | 第23-24页 |
| 1.5 Nampt-NAD+-Sirt1轴 | 第24页 |
| 1.6 研究意义 | 第24-26页 |
| 第2章 实验研究 | 第26-66页 |
| 第一节 miR-34a在自然衰老大鼠及衰老MSCs中的表达 | 第26-38页 |
| 1.实验材料 | 第26-28页 |
| 1.1 实验动物 | 第26页 |
| 1.2 主要仪器设备与实验耗材 | 第26-27页 |
| 1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 1.4 主要液体配制 | 第27-28页 |
| 2.实验方法 | 第28-33页 |
| 2.1 原代MSCs体外分离获取 | 第28页 |
| 2.2 MSCs的传代扩增 | 第28-29页 |
| 2.3 MSCs的冻存 | 第29页 |
| 2.4 MSCs的复苏 | 第29-30页 |
| 2.5 自然衰老大鼠模型及MSCs细胞衰老模型的建立 | 第30页 |
| 2.6 细胞形态学观察及分析 | 第30页 |
| 2.7 衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性检测 | 第30-31页 |
| 2.8 RT-qPCR检测miRNA表达 | 第31-33页 |
| 2.9 统计分析 | 第33页 |
| 3.实验结果 | 第33-38页 |
| 3.1 自然衰老大鼠模型及MSCs细胞衰老模型的建立 | 第33-36页 |
| 3.2 衰老MSCs中miR-34Family的表达 | 第36页 |
| 3.3 miR-34a在自然衰老大鼠及衰老MSCs中的表达 | 第36-38页 |
| 第二节 miR-34a对MSCs衰老的调控作用 | 第38-53页 |
| 1.实验材料 | 第38-39页 |
| 1.1 主要仪器设备与实验耗材 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 1.3 主要液体配制 | 第39页 |
| 2.实验方法 | 第39-43页 |
| 2.1 建立miR-34a过表达和沉默的MSCs | 第39页 |
| 2.2 RT-qPCR验证miR-34a过表达或沉默效率 | 第39页 |
| 2.3 miR-34a表达的变化对MSCs形态学特征的影响 | 第39-40页 |
| 2.4 miR-34a表达的变化对MSCs生长与增殖能力的影响 | 第40页 |
| 2.5 miR-34a表达的变化对MSCs细胞周期的影响 | 第40页 |
| 2.6 miR-34a表达的变化对MSCs成骨分化潜能的影响 | 第40-41页 |
| 2.7 miR-34a表达的变化对MSCs中SA-β-gal活性的影响 | 第41页 |
| 2.8 RT-qPCR检测miR-34a表达的变化对MSCs中衰老相关因子表达的影响 | 第41-42页 |
| 2.9 统计分析 | 第42-43页 |
| 3.实验结果 | 第43-53页 |
| 3.1 过表达miR-34a对MSCs衰老的影响 | 第43-46页 |
| 3.2 抑制miR-34a表达对MSCs衰老的作用 | 第46-53页 |
| 第三节 miR-34a调控MSCs衰老的机制研究 | 第53-66页 |
| 1.实验材料 | 第53-55页 |
| 1.1 主要仪器设备与实验耗材 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂 | 第53-54页 |
| 1.3 主要液体配制 | 第54-55页 |
| 2.实验方法 | 第55-61页 |
| 2.1 生物信息学预测分析miR-34a的潜在靶基因 | 第55页 |
| 2.2 miR-34a靶基因验证实验 | 第55-58页 |
| 2.3 miR-34a表达的变化对Nampt表达的影响 | 第58-59页 |
| 2.4 测定miR-34a过表达或沉默后MSCs内NAD~+含量 | 第59-60页 |
| 2.5 检测miR-34a过表达或沉默后MSCs中Sirt1活性 | 第60页 |
| 2.6 统计分析 | 第60-61页 |
| 3.实验结果 | 第61-66页 |
| 3.1 Nampt为miR-34a的直接靶基因 | 第61-62页 |
| 3.2 miR-34a表达的变化对Nampt表达的影响 | 第62-63页 |
| 3.3 miR-34a功能回复实验 | 第63-64页 |
| 3.4 miR-34a表达的变化对MSCs内NAD~+含量的影响 | 第64-65页 |
| 3.5 miR-34a表达的变化对MSCs中Sirt1活性的影响 | 第65-66页 |
| 第3章 讨论 | 第66-72页 |
| 3.1 自然衰老大鼠模型及MSCs细胞衰老模型的建立 | 第66-67页 |
| 3.2 自然衰老大鼠及衰老MSCs中miR-34a的表达 | 第67-68页 |
| 3.2.1 自然衰老大鼠各组织中miR-34a的表达情况 | 第67页 |
| 3.2.2 衰老MSCs中miR-34a的表达 | 第67-68页 |
| 3.3 miR-34a表达的变化对MSCs衰老的影响 | 第68-70页 |
| 3.4 miR-34a调控MSCs衰老的机制探讨 | 第70-72页 |
| 第4章 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
