| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 卡那霉素及卡那霉素B概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 卡那霉素的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.1.2 氨基糖苷类抗生素的药理及活性 | 第16-17页 |
| 1.2 卡那霉素的发酵生产 | 第17-18页 |
| 1.2.1 卡那霉素链霉菌培养基优化 | 第17-18页 |
| 1.2.2 卡那霉素发酵条件的优化 | 第18页 |
| 1.3 菌种的选育 | 第18-19页 |
| 1.4 卡那霉素的分离纯化 | 第19-20页 |
| 1.5 2-DOS类AGAs生物合成途径的研究 | 第20-26页 |
| 1.5.1 2-脱氧链霉胺(2-DOS)的生物合成 | 第20-22页 |
| 1.5.2 生物合成巴龙霉胺和新霉胺 | 第22-23页 |
| 1.5.3 4,5-双取代AGAs的合成 | 第23页 |
| 1.5.4 4,6-双取代AGAs的合成 | 第23-24页 |
| 1.5.5 卡那霉素链霉菌的生物合成途径研究 | 第24-26页 |
| 1.6 论文工作目的意义及创新点 | 第26-27页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第27-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27-28页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第28页 |
| 2.1.4 工具酶及缓冲液 | 第28页 |
| 2.1.5 引物 | 第28-29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 大肠杆菌质粒小量提取 | 第29页 |
| 2.2.2 链霉菌基因组小量提取 | 第29-30页 |
| 2.2.3 大肠杆菌(电转化)感受态的制备 | 第30页 |
| 2.2.4 DNA的转化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 DNA酶切与连接 | 第31页 |
| 2.2.6 DNA电泳和片段回收 | 第31-32页 |
| 2.2.7 PCR反应 | 第32-33页 |
| 2.2.8 结合转移方法 | 第33页 |
| 2.2.9 卡那霉素链霉菌诱变处理方法 | 第33-34页 |
| 2.2.9.1 卡那链霉菌出发菌株的选择 | 第33-34页 |
| 2.2.9.2 卡那链霉菌紫外诱变 | 第34页 |
| 2.2.9.3 卡那链霉菌化学诱变剂处理 | 第34页 |
| 2.2.9.4 耐自身代谢物诱变 | 第34页 |
| 2.2.9.5 原生质体制备 | 第34页 |
| 2.2.10 卡那发酵培养及产物的分离 | 第34-37页 |
| 2.2.10.1 卡那链霉菌发酵及发酵液的前处理 | 第34页 |
| 2.2.10.2 发酵液生物效价的測定 | 第34-35页 |
| 2.2.10.3 树脂的预处理和装柱 | 第35页 |
| 2.2.10.4 发酵液中KB的HPLC-ELSD检测 | 第35-37页 |
| 第三章 高产卡那霉素B菌株的选育 | 第37-47页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 高产菌株的选育-UV法 | 第37-41页 |
| 3.3 高产菌株的选育—原生质体法 | 第41-44页 |
| 3.4 小结 | 第44-47页 |
| 第四章 卡那霉素链霉菌的基因改造 | 第47-81页 |
| 4.1 前言 | 第47-48页 |
| 4.2 结合转移系统的建立 | 第48-52页 |
| 4.2.1 结合转移质粒 | 第48页 |
| 4.2.2 ET12567(pUZ8002,pSET152)转化子 | 第48-49页 |
| 4.2.3 抗生素的选择 | 第49页 |
| 4.2.4 结合转移培养基 | 第49-50页 |
| 4.2.5 热激温度的选择 | 第50-51页 |
| 4.2.6 抗生素覆盖的时间 | 第51页 |
| 4.2.7 结合子的验证 | 第51-52页 |
| 4.3 糖基转移酶的同源重组 | 第52-79页 |
| 4.3.1 载体构建 | 第53-59页 |
| 4.3.2 新载体构建 | 第59-66页 |
| 4.3.3 电转化大肠杆菌ET12567(pUZ8002) | 第66-68页 |
| 4.3.4 ET12567(pU28002,pSET152-R)与卡那链霉菌结合转移 | 第68-69页 |
| 4.3.5 neo8载体构建 | 第69-78页 |
| 4.3.6 电转化大肠杆菌ET12567(pUZ8002) | 第78页 |
| 4.3.7 ET12567(pUZ8002,pSET152-U)与卡那链霉菌结合转移 | 第78-79页 |
| 4.4 小结 | 第79-81页 |
| 第五章 结论与展望 | 第81-83页 |
| 5.1 结论 | 第81页 |
| 5.2 展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 附录 | 第87-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第95-97页 |
| 作者及导师简介 | 第97-98页 |
| 附件 | 第98-99页 |
