| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第18-26页 |
| 1.1 微生物发酵研究进展 | 第18-21页 |
| 1.1.1 酶和酶催化的简介 | 第18页 |
| 1.1.2 发酵简介及研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2 (+)γ-内酰胺酶的介绍 | 第21页 |
| 1.3 固定化酶的研究进展 | 第21-25页 |
| 1.3.1 固定化简介 | 第21-22页 |
| 1.3.2 酶固定化方法研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3.3 酶固定化载体研究进展 | 第23-25页 |
| 1.4 课题研究的目的、意义和内容 | 第25-26页 |
| 1.4.1 课题研究的目的和意义 | 第25页 |
| 1.4.2 课题研究的内容 | 第25-26页 |
| 第2章 重组大肠杆菌发酵产(+)γ-内酰胺酶的条件优化 | 第26-41页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 本章主要研究内容 | 第26页 |
| 2.3 实验仪器及材料(见附录) | 第26页 |
| 2.4 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.4.1 种子培养基和发酵培养基配方 | 第26-27页 |
| 2.4.2 实验相关参数检测 | 第27-28页 |
| 2.4.3 摇瓶接种方法和罐上接种方法 | 第28页 |
| 2.4.4 发酵罐上调控方法 | 第28页 |
| 2.4.5 菌种复壮方法 | 第28页 |
| 2.4.6 绘图方法 | 第28页 |
| 2.5 实验结果及讨论 | 第28-39页 |
| 2.5.1 摇瓶发酵鉴定菌种及复壮实验结果 | 第28-29页 |
| 2.5.2 摇瓶工艺发酵罐上放大培养 | 第29-31页 |
| 2.5.3 恒定溶氧发酵 | 第31页 |
| 2.5.4 恒温37℃发酵 | 第31-32页 |
| 2.5.5 恒温30℃培发酵 | 第32-33页 |
| 2.5.6 37℃培养42℃诱导 | 第33页 |
| 2.5.7 增加卡那霉素浓度 | 第33-35页 |
| 2.5.8 乳糖量加倍 | 第35-36页 |
| 2.5.9 对数期开始时降温至30℃ | 第36-37页 |
| 2.5.10 对数期开始时升温至42℃ | 第37-39页 |
| 2.5.11 对数期开始时升温后双诱导 | 第39页 |
| 2.6 本章小结 | 第39-41页 |
| 第3章 HA树脂固定化(+)γ-内酰胺酶研究 | 第41-57页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 本章主要研究内容 | 第41页 |
| 3.3 实验仪器与药品(见附录) | 第41页 |
| 3.4 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.4.1 HA树脂清洗 | 第41页 |
| 3.4.2 酶液制备 | 第41-42页 |
| 3.4.3 戊二醛交联方法 | 第42页 |
| 3.4.4 固定化酶制备方法 | 第42页 |
| 3.4.5 固定化酶酶活测定方法 | 第42页 |
| 3.4.6 交联、固定化条件优化研究方法 | 第42-43页 |
| 3.4.7 固定化酶催化反应条件的优化 | 第43页 |
| 3.4.8 酶学性质研究方法 | 第43-44页 |
| 3.4.9 固定化酶的表征方法 | 第44页 |
| 3.5 实验结果及讨论 | 第44-56页 |
| 3.5.1 戊二醛交联条件优化结果 | 第44-46页 |
| 3.5.1.1 戊二醛交联浓度实验结果 | 第44-45页 |
| 3.5.1.2 戊二醛交联时间实验结果 | 第45页 |
| 3.5.1.3 戊二醛交联温度实验结果 | 第45-46页 |
| 3.5.2 固定化优化条件结果 | 第46-47页 |
| 3.5.2.1 固定化温度实验结果 | 第46-47页 |
| 3.5.2.2 固定化时间实验结果 | 第47页 |
| 3.5.3 反应条件优化 | 第47-49页 |
| 3.5.3.1 金属离子对反应的影响 | 第47-48页 |
| 3.5.3.2 温度对底物的影响 | 第48页 |
| 3.5.3.3 固定化酶与底物用量比的确定 | 第48-49页 |
| 3.5.4 酶学性质研究结果 | 第49-53页 |
| 3.5.4.1 最适pH实验结果 | 第49-50页 |
| 3.5.4.2 最适温度实验结果 | 第50页 |
| 3.5.4.3 Km与Vmax的测定结果 | 第50-52页 |
| 3.5.4.4 表观活化能的测定结果 | 第52-53页 |
| 3.5.5 固定化酶的表征结果 | 第53-56页 |
| 3.5.5.1 固定化酶的耐热性实验结果 | 第53-54页 |
| 3.5.5.2 固定化酶的pH耐受性实验 | 第54-55页 |
| 3.5.5.3 固定化酶的储藏性实验结果 | 第55页 |
| 3.5.5.4 固定化酶重复使用实验结果 | 第55-56页 |
| 3.6 本章小结 | 第56-57页 |
| 第4章 离子交换树脂固定(+)γ-内酰胺酶研究 | 第57-67页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 本章主要研究内容 | 第57页 |
| 4.3 实验仪器与药品(见附录) | 第57页 |
| 4.4 实验方法 | 第57-59页 |
| 4.4.1 离子交换树脂的清洗方法 | 第57-58页 |
| 4.4.2 酶液的制备方法 | 第58页 |
| 4.4.3 固定化酶的制备原理和方法 | 第58-59页 |
| 4.4.4 固定化酶酶活的测定方法 | 第59页 |
| 4.4.5 载体筛选和固定化条件优化方法 | 第59页 |
| 4.4.6 酶学性质研究方法 | 第59页 |
| 4.4.7 固定化酶表征方法 | 第59页 |
| 4.5 实验结果及讨论 | 第59-66页 |
| 4.5.1 树脂筛选结果 | 第59-60页 |
| 4.5.2 固定化温度实验结果 | 第60页 |
| 4.5.3 固定化时间实验结果 | 第60-61页 |
| 4.5.4 酶学性质实验结果 | 第61-64页 |
| 4.5.4.1 最适pH实验结果 | 第61-62页 |
| 4.5.4.2 最适温度实验结果 | 第62-63页 |
| 4.5.4.3 Km与Vmax实验结果 | 第63页 |
| 4.5.4.4 表观活化能实验结果 | 第63-64页 |
| 4.5.5 固定化酶的表征结果 | 第64-66页 |
| 4.5.5.1 固定化酶耐热性实验结果 | 第64-65页 |
| 4.5.5.2 固定化酶储藏性实验结果 | 第65页 |
| 4.5.5.3 固定化酶重复使用实验结果 | 第65-66页 |
| 4.6 本章小结 | 第66-67页 |
| 第5章 功能化氧化石墨烯固定化(+)γ-内酰胺酶研究 | 第67-74页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 本章主要研究内容 | 第67页 |
| 5.3 实验仪器与药品(见附录) | 第67页 |
| 5.4 实验方法 | 第67-69页 |
| 5.4.1 氧化石墨烯的制备 | 第67-68页 |
| 5.4.2 氧化石墨烯羧基修饰方法 | 第68页 |
| 5.4.3 固定化酶制备 | 第68-69页 |
| 5.4.4 酶学性质研究 | 第69页 |
| 5.4.5 固定化酶表征 | 第69页 |
| 5.5 实验结果及讨论 | 第69-73页 |
| 5.5.1 固定化酶红外表征结果 | 第69-70页 |
| 5.5.2 固定化酶耐热性实验结果 | 第70页 |
| 5.5.3 固定化酶重复实验结果 | 第70-71页 |
| 5.5.4 固定化酶酶学性质实验结果 | 第71-73页 |
| 5.5.4.1 最适pH实验 | 第71-72页 |
| 5.5.4.2 最适温度实验 | 第72页 |
| 5.5.4.3 Km和Vmax实验结果 | 第72-73页 |
| 5.5.4.4 表观活化能实验结果 | 第73页 |
| 5.6 本章小结 | 第73-74页 |
| 第6章 总结与展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 附录 | 第78-80页 |
| 作者及导师简介 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82-83页 |