| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| ·百合及百合病毒研究进展 | 第11-16页 |
| ·百合简介 | 第11页 |
| ·百合产业现状 | 第11-12页 |
| ·百合病毒种类及危害 | 第12-13页 |
| ·百合无症病毒及百合斑驳病毒 | 第13-14页 |
| ·百合脱毒及抗病毒研究进展 | 第14-16页 |
| ·转录后基因沉默与植物RNA介导的抗病性 | 第16-18页 |
| ·转录后基因沉默 | 第16页 |
| ·RNA介导的病毒抗性 | 第16-18页 |
| ·Gateway技术的应用 | 第18-19页 |
| ·Gateway技术的概述 | 第18-19页 |
| ·Gateway技术在本研究中的应用 | 第19页 |
| ·基因的定量技术及内参选择应用 | 第19-24页 |
| ·常用的核酸定量法 | 第19-22页 |
| ·实时荧光定量PCR法 | 第22-23页 |
| ·本研究中用到的管家基因 | 第23-24页 |
| ·本研究的内容和意义 | 第24-26页 |
| 2 Gateway技术构建双价抗病毒表达载体 | 第26-44页 |
| ·实验材料和试剂 | 第26-27页 |
| ·实验材料和试剂 | 第26-27页 |
| ·实验所用仪器 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-36页 |
| ·感病百合总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·百合无症病毒及百合斑驳病毒衣壳蛋白基因的获得 | 第28-30页 |
| ·重组质粒的获得及检测 | 第30-32页 |
| ·克隆片段序列的测定 | 第32页 |
| ·LS-LMoV融合基因的构建过程 | 第32-33页 |
| ·Gateway技术构建抗病毒表达载体 | 第33-35页 |
| ·百合双抗表达载体工程菌的获得 | 第35-36页 |
| ·结果分析 | 第36-42页 |
| ·百合总RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·目的片段基因的获得 | 第37-39页 |
| ·LSV-LMoV融合基因的获得 | 第39-40页 |
| ·Gateway技术获得植物表达载体 | 第40-42页 |
| ·工程菌的获得 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 3 实时定量选择内参基因 | 第44-55页 |
| ·实验材料和试剂 | 第44页 |
| ·实验材料和试剂 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·百合总RNA的提取 | 第44页 |
| ·管家基因的选择与克隆 | 第44-46页 |
| ·Real-Time qPCR引物的设计以及cDNA的合成 | 第46-47页 |
| ·制备用于绘制标准曲线的梯度稀释DNA模板 | 第47-48页 |
| ·结果与计算 | 第48页 |
| ·结果分析 | 第48-53页 |
| ·内参基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·Real-Time qPCR反应体系的优化 | 第49-50页 |
| ·RNA纯度分析和完整性分析 | 第50页 |
| ·管家基因在不同品种不同组织的表达分析 | 第50-53页 |
| ·讨论 | 第53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 4 百合双抗病毒载体的遗传转化研究 | 第55-65页 |
| ·实验材料和试剂 | 第55-56页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·实验试剂 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-59页 |
| ·植物材料的准备 | 第56-57页 |
| ·潮霉素抗性筛选实验 | 第57页 |
| ·农杆菌的活化及培养 | 第57页 |
| ·百合的转化及植株的筛选和再生 | 第57-58页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第58页 |
| ·转基因植株的实时定量PCR检测 | 第58-59页 |
| ·结果分析 | 第59-63页 |
| ·潮霉素对鳞片再生的影响 | 第59-60页 |
| ·抗性植株的获得 | 第60页 |
| ·转基因百合的RT-PCR检测 | 第60-61页 |
| ·Real-time qPCR对转化苗的基因定量 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 5 结论与展望 | 第65-66页 |
| ·结论 | 第65页 |
| ·有待进一步开展的工作 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录A 缩略语与培养基配方 | 第72-74页 |
| 附录B LSV-LMoV序列图 | 第74-75页 |
| 附录C 载体结构图 | 第75-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |