| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 离子通道 | 第11-17页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 研究历史 | 第11页 |
| 1.3 离子通道的特性 | 第11-12页 |
| 1.4 离子通道的分类 | 第12-14页 |
| 1.4.1 按照门控分类 | 第12-14页 |
| 1.4.2 按照通透的离子分类 | 第14页 |
| 1.5 离子通道的研究方法 | 第14-15页 |
| 1.5.1 膜片钳技术 | 第15页 |
| 1.5.2 定点突变技术 | 第15页 |
| 1.6 离子通道生理功能 | 第15-16页 |
| 1.7 离子通道病 | 第16-17页 |
| 第二章 甘氨酸受体(Glycine receptors,GlyRs) | 第17-25页 |
| 2.1 GlyRs的结构 | 第17-18页 |
| 2.2 GlyRs的调节物 | 第18-25页 |
| 2.2.1 大麻素配体(Cannabinoid ligands) | 第19-20页 |
| 2.2.2 酒精(Aclohol) | 第20-21页 |
| 2.2.3 常见麻醉剂(Anaesthetics) | 第21-22页 |
| 2.2.4 谷氨酸(Glutamate) | 第22页 |
| 2.2.5 锌离子(Zinc,Zn~(2+)) | 第22-25页 |
| 第三章 γ-氨基丁酸A型受体(GABA_A Receptors) | 第25-29页 |
| 3.1 GABA位点 | 第25-26页 |
| 3.2 印防己毒素位点 | 第26-27页 |
| 3.3 苯二氮卓类位点 | 第27-28页 |
| 3.4 其他结合位点 | 第28-29页 |
| 第四章 胞外氯离子调控GlyRs和GABA_AR的研究意义 | 第29-33页 |
| 4.1 氯离子与受体发育 | 第29-30页 |
| 4.2 离子通道的脱敏作用以及研究意义 | 第30-33页 |
| 第五章 实验材料和方法 | 第33-49页 |
| 5.1 相关信息的获取和调研 | 第33页 |
| 5.2 克隆目的基因 | 第33-38页 |
| 5.2.1 制备DH-5α E.coli感受态细胞 | 第33-35页 |
| 5.2.2 重组质粒转化 | 第35页 |
| 5.2.3 单克隆鉴定 | 第35-36页 |
| 5.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 5.2.5 目的质粒DNA的大量提取 | 第37-38页 |
| 5.3 单细胞膜片钳实验的准备 | 第38-41页 |
| 5.3.1 人胚肾上皮细胞(HEK293T细胞)的复苏 | 第38-39页 |
| 5.3.2 人胚肾上皮细胞(HEK293T细胞)的传代培养 | 第39页 |
| 5.3.3 人胚肾上皮细胞(HEK293T细胞)的冻存 | 第39-40页 |
| 5.3.4 HEK293T过量表达GlyRs和GABA_AR | 第40-41页 |
| 5.4 质粒定点突变 | 第41-43页 |
| 5.4.1 设计一对携带突变氨基酸的引物 | 第41-42页 |
| 5.4.2 突变目的DNA的扩增 | 第42-43页 |
| 5.4.3 Dpn1酶消化模板DNA | 第43页 |
| 5.4.4 转化 | 第43页 |
| 5.4.5 小量提取突变质粒 | 第43页 |
| 5.4.6 大量提取突变质粒 | 第43页 |
| 5.5 膜片钳实验试剂的制备 | 第43-46页 |
| 5.5.1 正常细胞外液(150mM氯离子外液) | 第43-44页 |
| 5.5.2 低氯细胞外液(10mM氯离子外液) | 第44页 |
| 5.5.3 脑片膜片钳实验所需的基本试剂 | 第44-45页 |
| 5.5.4 电极内液的制备 | 第45-46页 |
| 5.6 单细胞膜片钳实验 | 第46-48页 |
| 5.7 脑片膜片钳实验 | 第48-49页 |
| 5.7.1 脑片准备 | 第48页 |
| 5.7.2 脑片膜片钳记录 | 第48-49页 |
| 第六章 胞外氯离子对GlyRs和GABA_ARs的影响 | 第49-63页 |
| 6.1 实验结果 | 第49-59页 |
| 6.1.1 低氯外液对GlyRs的脱敏作用的影响 | 第49-50页 |
| 6.1.2 低氯外液对GABA_ARs的脱敏作用的影响 | 第50-52页 |
| 6.1.3 脑片实验结果 | 第52-53页 |
| 6.1.4 GlyRs和GABA_ARs的β5段序列比对 | 第53页 |
| 6.1.5 GlyR α1亚基突变 | 第53-56页 |
| 6.1.6 GABA_ARsα1亚基突变 | 第56-58页 |
| 6.1.7 GABA_ARsβ2亚基突变 | 第58-59页 |
| 6.2 结论与讨论 | 第59-60页 |
| 6.3 总结与展望 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
