| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-16页 |
| 1.1.1 全球能源危机日益严峻 | 第13-14页 |
| 1.1.2 微藻作为新型生物质能源原料受到广泛关注 | 第14-16页 |
| 1.2 传统方法提高微藻脂质积累 | 第16-18页 |
| 1.3 微藻脂质代谢途径概况 | 第18-19页 |
| 1.4 微藻甘油三酯积累相关代谢途径重要节点研究现状 | 第19-22页 |
| 1.4.1 微藻遗传转化体系的建立 | 第19-20页 |
| 1.4.2 脂质合成途径关键节点对微藻脂质累积的作用 | 第20-21页 |
| 1.4.3 其他代谢途径关键节点对微藻脂质累积的作用 | 第21-22页 |
| 1.5 选题的意义以及设计思路 | 第22-24页 |
| 1.6 主要创新点 | 第24-25页 |
| 1.7 中英文对照表 | 第25-27页 |
| 第二章 三角褐指藻AGPAT1调控叶绿体TAG合成 | 第27-61页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-46页 |
| 2.3.1 藻种培养 | 第30页 |
| 2.3.2 三角褐指藻AGPAT1基因分析 | 第30-31页 |
| 2.3.3 三角褐指藻AGPAT1基因克隆 | 第31-34页 |
| 2.3.4 利用同源重组法构建表达载体 | 第34-35页 |
| 2.3.5 电转化方法将载体导入至三角褐指藻 | 第35-36页 |
| 2.3.6 利用分子生物学手段鉴定转化藻 | 第36-41页 |
| 2.3.7 转化藻AGPAT1蛋白酶活检测 | 第41-42页 |
| 2.3.8 转化藻生理指标检测 | 第42页 |
| 2.3.9 转化藻细胞组分检测 | 第42-44页 |
| 2.3.10 共聚焦观察微藻形态和油体 | 第44-45页 |
| 2.3.11 胶体金法免疫电镜观察蛋白定位 | 第45页 |
| 2.3.12 统计学分析 | 第45-46页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第46-60页 |
| 2.4.1 三角褐指藻AGPAT1序列分析 | 第46-49页 |
| 2.4.2 AGPAT1成功导入三角褐指藻并表达 | 第49-51页 |
| 2.4.3 过表达AGPAT1不影响生长和光合速率 | 第51-52页 |
| 2.4.4 过表达AGPAT1改变初级代谢产物的含量 | 第52-53页 |
| 2.4.5 过表达AGPAT1影响TAG合成通路中其他关键基因的表达 | 第53页 |
| 2.4.6 过表达AGPAT1显著提高脂质积累 | 第53-56页 |
| 2.4.7 过表达AGPAT1改变微藻脂肪酸组分 | 第56-58页 |
| 2.4.8 AGPAT1定位于叶绿体中并参与叶绿体TAG合成 | 第58-60页 |
| 2.5 小结 | 第60-61页 |
| 第三章 GPAT1和AGPAT1对TAG生成过程中脂肪酸选择性的调控 | 第61-82页 |
| 3.1 引言 | 第61-62页 |
| 3.2 实验材料 | 第62页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第62页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第62页 |
| 3.3 实验方法 | 第62-68页 |
| 3.3.1 藻种培养 | 第62页 |
| 3.3.2 三角褐指藻GPAT1和AGPAT1基因克隆 | 第62-63页 |
| 3.3.3 利用同源重组法构建表达载体 | 第63-64页 |
| 3.3.4 电转化方法将双质粒同时导入至三角褐指藻 | 第64-65页 |
| 3.3.5 利用分子生物学手段鉴定转化藻 | 第65页 |
| 3.3.6 转化藻GPAT1和AGPAT1蛋白酶活检测 | 第65页 |
| 3.3.7 转化藻生理指标检测 | 第65-66页 |
| 3.3.8 转化藻亚细胞定位检测 | 第66页 |
| 3.3.9 转化藻细胞组分检测 | 第66页 |
| 3.3.10 转化藻TAG中脂肪酸成分检测 | 第66页 |
| 3.3.11 转化藻关键通路中基因转录水平检测 | 第66-67页 |
| 3.3.12 芝麻酚处理后转化藻生理指标检测 | 第67-68页 |
| 3.3.13 浅蓝菌素处理后转化藻总脂肪酸含量检测 | 第68页 |
| 3.3.14 统计学分析 | 第68页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第68-80页 |
| 3.4.1 双基因GPAT1和AGPAT1成功导入三角褐指藻并表达 | 第68-70页 |
| 3.4.2 GPAT1和AGPAT1均定位于三角褐指藻叶绿体 | 第70-71页 |
| 3.4.3 GPAT1和AGPAT1双基因过表达提高对数期中期微藻生长 | 第71-72页 |
| 3.4.4 GPAT1和AGPAT1双基因过表达改变初级代谢产物的含量 | 第72-73页 |
| 3.4.5 GPAT1和AGPAT1双基因过表达促进脂质过量生产 | 第73-75页 |
| 3.4.6 双基因GPAT1和AGPAT1过表达协调其他通路关键基因的转录水平 | 第75-78页 |
| 3.4.7 GPAT1和AGPAT1双基因过表达通过原核途径提高脂肪酸合成 | 第78-80页 |
| 3.5 小结 | 第80-82页 |
| 第四章 三角褐指藻MCAT和D5b联合作用富集长链多不饱和脂肪酸 | 第82-96页 |
| 4.1 引言 | 第82-83页 |
| 4.2 实验材料 | 第83页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第83页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第83页 |
| 4.3 实验方法 | 第83-85页 |
| 4.3.1 藻种培养 | 第83页 |
| 4.3.2 三角褐指藻MCAT和PtD5b基因克隆 | 第83页 |
| 4.3.3 利用同源重组法构建表达载体 | 第83-84页 |
| 4.3.4 电转化方法将双质粒同时导入三角褐指藻 | 第84页 |
| 4.3.5 利用分子生物学手段鉴定转化藻 | 第84页 |
| 4.3.6 转化藻MCAT蛋白酶活检测 | 第84页 |
| 4.3.7 转化藻密度和生长周期测定 | 第84-85页 |
| 4.3.8 转化藻中性脂含量检测 | 第85页 |
| 4.3.9 转化藻总脂含量检测 | 第85页 |
| 4.3.10 转化藻总脂各成分含量检测 | 第85页 |
| 4.3.11 转化藻脂肪酸含量检测 | 第85页 |
| 4.3.12 统计学分析 | 第85页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第85-94页 |
| 4.4.1 三角褐指藻MCAT和PtD5b序列分析 | 第85-86页 |
| 4.4.2 分子水平鉴定MCAT和PtD5b成功在三角褐指藻中整合并表达 | 第86-88页 |
| 4.4.3 过表达MCAT和PtD5b不影响三角褐指藻的生理状态 | 第88页 |
| 4.4.4 MCAT和PtD5b联合作用提升了三角褐指藻脂质累积 | 第88-90页 |
| 4.4.5 过表达MCAT和PtD5b造成系统性代谢调控引发LC-PUFA积累 | 第90-92页 |
| 4.4.6 过表达MCAT和PtD5b造成不同脂成分中LC-PUFAs分布改变 | 第92-94页 |
| 4.5 小结 | 第94-96页 |
| 第五章 三角褐指藻油体蛋白参与油体生物发生和TAG积累 | 第96-115页 |
| 5.1 引言 | 第96-97页 |
| 5.2 实验材料 | 第97页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第97页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第97页 |
| 5.3 实验方法 | 第97-100页 |
| 5.3.1 藻种培养 | 第97页 |
| 5.3.2 实时定量PCR检测三角褐指藻LDP1转录水平 | 第97页 |
| 5.3.3 三角褐指藻LDP1基因克隆 | 第97-98页 |
| 5.3.4 利用同源重组法构建表达载体 | 第98页 |
| 5.3.5 电转化方法将双质粒同时导入三角褐指藻 | 第98页 |
| 5.3.6 利用分子生物学手段鉴定转化藻 | 第98页 |
| 5.3.7 转化藻脂质含量和脂肪酸组分检测 | 第98页 |
| 5.3.8 共聚焦显微观察微藻形态和油体 | 第98-99页 |
| 5.3.9 转化藻亚细胞定位检测 | 第99页 |
| 5.3.10 三角褐指藻油体的分离 | 第99页 |
| 5.3.11 油体蛋白的提取、SDS-PAGE分离和蛋白鉴定 | 第99-100页 |
| 5.3.12 统计学分析 | 第100页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第100-114页 |
| 5.4.1 三角褐指藻LDP1序列分析 | 第100-101页 |
| 5.4.2 缺氮和缺磷条件下LDP1的转录水平 | 第101-103页 |
| 5.4.3 分子生物学方法鉴定重组质粒导入三角褐指藻 | 第103-104页 |
| 5.4.4 LDP1参与三角褐指藻脂质生物合成和积累 | 第104-108页 |
| 5.4.5 LDP1参与转化藻中脂肪酸组分的改变 | 第108-109页 |
| 5.4.6 LDP1调控TAG和脂肪酸合成相关基因转录表达 | 第109-111页 |
| 5.4.7 三角褐指藻油体蛋白组学鉴定显示LDP1是主要组成蛋白 | 第111-113页 |
| 5.4.8 亚细胞定位显示LDP1位于油体 | 第113-114页 |
| 5.5 小结 | 第114-115页 |
| 第六章 三角褐指藻内源和人源PNPLA3调控三角褐指藻TAG合成 | 第115-129页 |
| 6.1 引言 | 第115-116页 |
| 6.2 实验材料 | 第116页 |
| 6.2.1 实验试剂 | 第116页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第116页 |
| 6.3 实验方法 | 第116-118页 |
| 6.3.1 藻种培养 | 第116页 |
| 6.3.2 三角褐指藻PNPLA3基因分析 | 第116页 |
| 6.3.3 三角褐指藻PNPLA3基因克隆和人源PNPLA3基因优化 | 第116页 |
| 6.3.4 利用同源重组法构建表达载体 | 第116页 |
| 6.3.5 电转化方法将质粒导入三角褐指藻 | 第116-117页 |
| 6.3.6 利用分子生物学手段鉴定转化藻 | 第117页 |
| 6.3.7 转化藻生理指标检测 | 第117页 |
| 6.3.8 转化藻脂质含量检测 | 第117-118页 |
| 6.3.9 共聚焦显微观察微藻形态和油体 | 第118页 |
| 6.3.10 统计学分析 | 第118页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第118-127页 |
| 6.4.1 三角褐指藻PNPLA3序列分析 | 第118-119页 |
| 6.4.2 内源PNPLA3和人源Pnpla3I148M导入三角褐指藻并表达 | 第119-121页 |
| 6.4.3 过表达内源PNPLA3和人源Pnpla3I148M不影响生长和光合速率 | 第121-122页 |
| 6.4.4 过表达内源PNPLA3和人源Pnpla3I148M显著提高微藻脂质含量 | 第122-125页 |
| 6.4.5 过表达内源PNPLA3和人源Pnpla3I148M改变微藻脂肪酸组分 | 第125-127页 |
| 6.5 小结 | 第127-129页 |
| 总结与展望 | 第129-131页 |
| 参考文献 | 第131-146页 |
| 博士期间发表的论文和奖励 | 第146-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
