| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-20页 |
| 1 PRRSV的发现 | 第11页 |
| 2 PRRS的流行及危害 | 第11-12页 |
| 3 PRRSV研究进展 | 第12-20页 |
| ·病原学 | 第12-15页 |
| ·流行病学 | 第15页 |
| ·PRRSV的致病机理 | 第15页 |
| ·临床症状与病理变化 | 第15-17页 |
| ·PRRS疫苗研究现状 | 第17-18页 |
| ·防制 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 试验研究 | 第20-44页 |
| 1 试验材料 | 第20-22页 |
| ·病料 | 第20页 |
| ·细胞株与菌株 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-32页 |
| ·细胞复苏、培养及传代 | 第22-23页 |
| ·病料处理 | 第23页 |
| ·病毒的分离 | 第23页 |
| ·核酸型鉴定 | 第23页 |
| ·病毒理化特性的测定 | 第23-24页 |
| ·感染谱的测定 | 第24页 |
| ·血凝试验 | 第24页 |
| ·TCID50的测定 | 第24页 |
| ·病毒形态电镜观察 | 第24页 |
| ·中和试验 | 第24-25页 |
| ·病毒细胞培养物和肺组织培养物RNA的提取 | 第25页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR产物的回收与纯化 | 第26页 |
| ·回收产物的连接 | 第26页 |
| ·普通大肠杆菌E.coli Rosetta 感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的小量制备 | 第27页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·阳性克隆质粒的限制性内切酶酶切鉴定 | 第27页 |
| ·阳性克隆质粒的序列测定与分析 | 第27-28页 |
| ·GP4、GP5蛋白的原核表达 | 第28页 |
| ·包涵体的分离溶解及保存 | 第28-29页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制及电泳 | 第29页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶染色、脱色和干燥 | 第29-30页 |
| ·GP4、GP5蛋白的回收纯化 | 第30页 |
| ·Western blot印迹检测目的蛋白的免疫原性与特异性 | 第30页 |
| ·间接ELISA方法条件的优化 | 第30-31页 |
| ·间接ELISA的特异性测定 | 第31-32页 |
| 3 试验结果 | 第32-40页 |
| ·细胞传代分离病毒结果 | 第32页 |
| ·核酸型鉴定结果 | 第32页 |
| ·病毒理化特性的测定结果 | 第32页 |
| ·感染谱的测定结果 | 第32-33页 |
| ·病毒的红细胞血凝谱试验结果 | 第33页 |
| ·TCID50的测定结果 | 第33页 |
| ·病毒形态透射电镜观察结果 | 第33页 |
| ·中和试验的结果 | 第33页 |
| ·病毒的RT-PCR检测 | 第33-34页 |
| ·病毒的核苷酸序列测定 | 第34页 |
| ·重组表达载体pET-28a-GP4、pET-28a-GP5的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| ·IPTG诱导浓度及时间的确定 | 第35页 |
| ·重组质粒pET-28a-GP4、pET-28a-GP4表达的SDS-PAGE分析结果 | 第35页 |
| ·目标蛋白的纯化结果 | 第35-37页 |
| ·薄层扫描分析结果 | 第37页 |
| ·目标蛋白的鉴定 | 第37页 |
| ·间接ELISA方法条件优化结果 | 第37-39页 |
| ·抗原最佳包被浓度及待检血清最佳稀释度的选择 | 第37-38页 |
| ·ELISA反应时间的优化 | 第38-39页 |
| ·间接ELISA程序的确定 | 第39页 |
| ·间接ELISA方法的特异性测定结果 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
