| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一部分 大鼠HSC及SEC原代分离实验研究 | 第11-17页 |
| 一、材料与方法 | 第11-15页 |
| (一)实验材料 | 第11-12页 |
| 1.实验动物 | 第11页 |
| 2.主要实验试剂 | 第11-12页 |
| 3.主要仪器设备 | 第12页 |
| 4.主要试剂配制 | 第12页 |
| (二)实验方法 | 第12-15页 |
| 1.模型制备 | 第12-13页 |
| 2.HSC及SEC分离 | 第13-14页 |
| 3.台盼蓝计数及免疫荧光鉴定 | 第14-15页 |
| 二、结果 | 第15-17页 |
| (一)光镜下观察结果 | 第15页 |
| (二)台盼蓝计数结果 | 第15页 |
| (三)免疫荧光鉴定结果 | 第15-17页 |
| 第二部分 shRNA重组慢病毒感染大鼠HSC过表达VEGF实验研究 | 第17-24页 |
| 一、材料与方法 | 第17-22页 |
| (一)实验材料 | 第17-18页 |
| 1.实验细胞 | 第17页 |
| 2.主要实验试剂 | 第17-18页 |
| 3.主要仪器设备 | 第18页 |
| (二)实验方法 | 第18-22页 |
| 1.慢病毒载体的构建 | 第19-20页 |
| 2.病毒包装 | 第20页 |
| 3.病毒感染HSC | 第20页 |
| 4.嘌呤霉素筛选稳定转染细胞 | 第20-21页 |
| 5.指标检测 | 第21页 |
| 6.统计方法 | 第21-22页 |
| 二、结果 | 第22-24页 |
| (一)慢病毒PCR测序结果 | 第22-23页 |
| (二)荧光倒置显微镜下观察转染后HSC细胞绿色荧光蛋白的表达变化 | 第23页 |
| (三)转染后VEGF相对表达量 | 第23-24页 |
| 第三部分 VEGF/VEGFR在HSC/SEC共培养体系中的表达及疏肝健脾活血方的干预作用 | 第24-50页 |
| 一、材料与方法 | 第24-30页 |
| (一)实验材料 | 第24-26页 |
| 1.实验动物及实验细胞 | 第24页 |
| 2.实验药材 | 第24页 |
| 3.主要实验试剂 | 第24-25页 |
| 4.主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 5.PCR引物和扩增片段长度如下 | 第26页 |
| (二)实验方法 | 第26-30页 |
| 1.含药血清制备 | 第26页 |
| 2.MTT法确定最佳含药血清浓度 | 第26-27页 |
| 3.细胞分组及干预 | 第27页 |
| 4.指标检测 | 第27-29页 |
| 5.统计学方法 | 第29-30页 |
| 二、结果 | 第30-42页 |
| (一)最佳含药血清的浓度确定 | 第30页 |
| (二)各组HSC活力及增值率 | 第30-32页 |
| (三)各组SEC中CD31、vWF蛋白相对表达量比较 | 第32-35页 |
| (四)各组中HSC的胶原Ⅳ、VEGF、VEGFR-2蛋白相对表达量比较 | 第35-39页 |
| (五)各组中HSC的VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2mRNA相对表达结果 | 第39-42页 |
| 三、分析与讨论 | 第42-50页 |
| (一)VEGF在血管新生中起重要作用 | 第42-43页 |
| (二)VEGF在肝纤维化发展中促进病理性血管新生 | 第43-45页 |
| 1.SEC与肝窦毛细血管化 | 第43-44页 |
| 2.VEGF加重肝窦毛细血管化促进肝纤维化发展 | 第44-45页 |
| 3.VEGF促进血管网络形成加重血液分流 | 第45页 |
| 4.VEGF增加血管通透性并加重炎症反应 | 第45页 |
| (三)中医学对肝纤维化中病理性血管新生的认识 | 第45-48页 |
| 1.病名的认识 | 第45-46页 |
| 2.病因病机 | 第46-47页 |
| 3.中医治则治法 | 第47页 |
| 4.疏肝健脾活血方的组方及功效 | 第47-48页 |
| (四)实验结果分析 | 第48-50页 |
| 1.SEC失窗孔后加重肝纤维化 | 第48页 |
| 2.VEGF在肝纤维早期即促进肝窦毛细血管化的发展 | 第48-49页 |
| 3.疏肝健脾活血方对肝纤维化时病理性血管新生干预的作用机制 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附图 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 文献综述 | 第62-73页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
