| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-16页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌 | 第11-13页 |
| 1.1.1 禾谷镰刀菌的生物学特征 | 第11页 |
| 1.1.2 禾谷镰刀菌的生活史及侵染循环 | 第11-12页 |
| 1.1.3 禾谷镰刀菌的毒素 | 第12-13页 |
| 1.2 蛋白激酶研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 蛋白激酶研究概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 禾谷镰刀菌蛋白激酶 | 第14页 |
| 1.2.3 蛋白激酶A研究概述 | 第14-15页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 禾谷镰刀菌中PKR基因的功能分析 | 第16-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第16-31页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第16页 |
| 2.1.2 PKR基因的预测与进化分析 | 第16页 |
| 2.1.3 禾谷镰刀菌基因组的提取 | 第16-17页 |
| 2.1.4 PKR基因的敲除 | 第17-20页 |
| 2.1.4.1 同源片段扩增与回收 | 第17-18页 |
| 2.1.4.2 禾谷镰刀菌原生质体转化 | 第18-20页 |
| 2.1.4.3 转化子PCR检测 | 第20页 |
| 2.1.5 PKR基因敲除转化子的southern杂交 | 第20-21页 |
| 2.1.6 菌落形态观察及生长速率测定 | 第21-22页 |
| 2.1.7 DAPI和calcofluor染色 | 第22页 |
| 2.1.8 分生孢子产孢率测定及形态观察 | 第22页 |
| 2.1.9 分生孢子糖原染色 | 第22页 |
| 2.1.10 分生孢子萌发率测定 | 第22-23页 |
| 2.1.11 分生孢子碘化丙啶染色 | 第23页 |
| 2.1.12 GFP-ATG8融合蛋白载体构建与转化 | 第23-26页 |
| 2.1.13 有性生殖表型观察 | 第26-27页 |
| 2.1.14 禾谷镰刀菌致病性鉴定 | 第27页 |
| 2.1.14.1 小麦穗接种实验 | 第27页 |
| 2.1.14.2 玉米须接种实验 | 第27页 |
| 2.1.15 毒素测定 | 第27-29页 |
| 2.1.15.1 小麦单籽粒毒素测定 | 第27-28页 |
| 2.1.15.2 液体培养基毒素测定 | 第28页 |
| 2.1.15.3 大米培养基毒素测定 | 第28-29页 |
| 2.1.16 qRT-PCR | 第29-30页 |
| 2.1.16.1 禾谷镰刀菌RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.1.16.2 反转录合成cDNA | 第30页 |
| 2.1.16.3 qRT-PCR反应 | 第30页 |
| 2.1.17 PKR-GFP融合蛋白载体构建与转化 | 第30页 |
| 2.1.18 分生孢子荧光定位与染色 | 第30-31页 |
| 2.1.19 菌丝荧光定位与染色 | 第31页 |
| 2.2 结果与分析 | 第31-41页 |
| 2.2.1 PKR基因的预测与进化分析 | 第31-33页 |
| 2.2.2 PKR基因的敲除 | 第33-34页 |
| 2.2.3 PKR对禾谷镰刀菌的菌丝生长及核的分布具有重要作用 | 第34-35页 |
| 2.2.4 PKR的敲除影响分生孢子的产生及其活力 | 第35-37页 |
| 2.2.5 PKR的敲除影响细胞自噬 | 第37-38页 |
| 2.2.6 PKR基因在有性生殖及植物侵染过程中发挥重要作用 | 第38-39页 |
| 2.2.7 PKR对毒素的产生起负调控作用 | 第39-40页 |
| 2.2.8 PKR对黄色镰刀菌素的产生起正调控作用 | 第40页 |
| 2.2.9 pkr突变体的互补 | 第40-41页 |
| 2.2.10 Pkr定位于细胞核与细胞质 | 第41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 pkr突变体的自发角变 | 第43-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 3.1.1 菌株 | 第43页 |
| 3.1.2 角变子的菌落形态观察及生长速率测定 | 第43页 |
| 3.1.3 角变子产孢量测定 | 第43页 |
| 3.1.4 角变子菌株单孢分离 | 第43页 |
| 3.1.5 角变子PCR测序 | 第43-44页 |
| 3.1.6 禾谷镰刀菌RNA提取 | 第44-45页 |
| 3.1.7 RNA反转录为cDNA | 第45页 |
| 3.1.8 实时荧光定量PCR | 第45页 |
| 3.2 结果与分析 | 第45-51页 |
| 3.2.1 角变子的表型 | 第45-48页 |
| 3.2.2 角变子突变位点的鉴定与分析 | 第48-50页 |
| 3.2.3 pkr突变体及角变子中催化亚基表达量分析 | 第50页 |
| 3.2.4 角变子全基因组测序分析 | 第50-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 全文总结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
