| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第12-13页 |
| 1.2 蛋白酶的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 蛋白酶的分类 | 第13页 |
| 1.2.2 产蛋白酶的微生物 | 第13-14页 |
| 1.2.3 蛋白酶的应用 | 第14-16页 |
| 1.3 提高菌株产酶方法 | 第16-18页 |
| 1.3.1 传统诱变技术 | 第16-17页 |
| 1.3.2 空间诱变技术 | 第17页 |
| 1.3.3 基因工程方法 | 第17-18页 |
| 1.4 生产中存在的主要问题 | 第18页 |
| 1.5 主要研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 一株蛋白酶产生菌的筛选和鉴定 | 第19-31页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第19-21页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第19页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.3 主要培养基 | 第20-21页 |
| 2.2.4 环境样品 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.3.1 产酶菌株的初筛 | 第21页 |
| 2.3.2 产酶菌株的复筛 | 第21页 |
| 2.3.3 蛋白酶活力测定 | 第21-23页 |
| 2.3.4 菌株的电镜形态观察 | 第23页 |
| 2.3.5 菌株生理生化鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.6 细菌16SrDNA基因序列测定 | 第24页 |
| 2.3.7 菌株的生长曲线和产酶曲线 | 第24-25页 |
| 2.4 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.4.1 酶活力测定标准曲线 | 第25页 |
| 2.4.2 产蛋白酶菌株的筛选 | 第25-26页 |
| 2.4.3 菌株的鉴定 | 第26-29页 |
| 2.4.4 生长曲线和产酶曲线 | 第29页 |
| 2.5 本章小结 | 第29-31页 |
| 第三章 菌株 CF-02 产蛋白酶发酵条件优化 | 第31-40页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第31-32页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第31页 |
| 3.2.2 实验菌株 | 第31页 |
| 3.2.3 主要培养基 | 第31-32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-34页 |
| 3.3.1 培养方法 | 第32页 |
| 3.3.2 蛋白酶活力测定方法 | 第32页 |
| 3.3.3 碳源及其添加量对产酶的影响 | 第32页 |
| 3.3.4 氮源及其添加量对产酶的影响 | 第32页 |
| 3.3.5 金属离子及其添加量对产酶的影响 | 第32-33页 |
| 3.3.6 表面活性剂对产酶的影响 | 第33页 |
| 3.3.7 初始pH对产酶的影响 | 第33页 |
| 3.3.8 温度对产酶的影响 | 第33页 |
| 3.3.9 响应面优化 | 第33页 |
| 3.3.10 100 L发酵罐发酵试验 | 第33-34页 |
| 3.4 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.4.1 碳源及其添加量对产酶的影响 | 第34页 |
| 3.4.2 氮源及其添加量对产酶的影响 | 第34-35页 |
| 3.4.3 金属离子及其添加量对产酶的影响 | 第35页 |
| 3.4.4 表面活性剂对产酶的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.5 初始pH对产酶的影响 | 第36页 |
| 3.4.6 培养温度对产酶的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.7 响应面优化 | 第37-38页 |
| 3.4.8 100L发酵罐发酵试验 | 第38-39页 |
| 3.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第四章 酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第40-50页 |
| 4.1 引言 | 第40页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第40-41页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第40页 |
| 4.2.2 材料 | 第40页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第40-41页 |
| 4.2.4 溶液的配制 | 第41页 |
| 4.3 试验方法 | 第41-44页 |
| 4.3.1 酶活测定方法 | 第41页 |
| 4.3.2 可溶性蛋白测定 | 第41-42页 |
| 4.3.3 粗酶液的制备 | 第42页 |
| 4.3.4 硫酸铵盐析曲线 | 第42页 |
| 4.3.5 蛋白酶粗品的制备 | 第42页 |
| 4.3.6 DEAE-SepharoseFF阴离子交换层析 | 第42-43页 |
| 4.3.7 蛋白质质谱鉴定 | 第43-44页 |
| 4.3.8 酶性质分析 | 第44页 |
| 4.4 结果与分析 | 第44-49页 |
| 4.3.1 蛋白质标准曲线 | 第44-45页 |
| 4.3.2 硫酸铵盐析曲线 | 第45页 |
| 4.3.3 蛋白酶粗品的制备 | 第45-46页 |
| 4.3.4 DEAE-SepharoseFF阴离子交换层析 | 第46-47页 |
| 4.3.5 酶蛋白的质谱鉴定 | 第47页 |
| 4.3.6 酶最适作用温度及pH值 | 第47-48页 |
| 4.3.7 酶对温度及pH值的耐受性 | 第48页 |
| 4.3.8 金属离子对酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 4.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 蛋白酶基因毕赤酵母表达系统构建 | 第50-62页 |
| 5.1 引言 | 第50-51页 |
| 5.1.1 毕赤酵母表达系统 | 第50页 |
| 5.1.2 常用的菌株类型和载体 | 第50-51页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第51-53页 |
| 5.2.1 主要仪器 | 第51页 |
| 5.2.2 菌株和质粒 | 第51页 |
| 5.2.3 工具酶和试剂 | 第51-52页 |
| 5.2.4 培养基配制 | 第52页 |
| 5.2.5 溶液的配制 | 第52-53页 |
| 5.3 实验流程 | 第53页 |
| 5.4 试验方法 | 第53-59页 |
| 5.4.1 重组载体的构建 | 第53-57页 |
| 5.4.2 毕赤酵母感受态细胞的转化 | 第57-59页 |
| 5.5 结果与讨论 | 第59-61页 |
| 5.5.1 重组载体构建示意图 | 第59页 |
| 5.5.2 PCR 扩增目的基因 | 第59-60页 |
| 5.5.3 载体pPIC9K-yyqx的构建 | 第60页 |
| 5.5.4 重组毕赤酵母转化子 | 第60-61页 |
| 5.6 小结 | 第61-62页 |
| 结论与讨论 | 第62-64页 |
| 1.结论 | 第62页 |
| 2.讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简历 | 第71页 |