| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 Aldh4a1基因对斑马鱼早期胚胎发育的影响 | 第11-59页 |
| 1. 前言 | 第11-14页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第14-39页 |
| 2.1 实验动物 | 第14页 |
| 2.2 斑马鱼器官组织的解剖及各时期胚胎的收集 | 第14页 |
| 2.3 试剂盒、载体、酶及菌株 | 第14-15页 |
| 2.4 试剂配置 | 第15-18页 |
| 2.5 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.6 利用RT-PCR,qRT-PCR分析野生型斑马鱼基因Aldh4a1的表达 | 第19-23页 |
| 2.7 利用CRISPR/Cas9技术构建Aldh4a1突变体 | 第23-34页 |
| 2.8 Aldh4a1纯合突变体表型及行为观察 | 第34-35页 |
| 2.9 Aldh4a1纯合突变体及野生斑马鱼心率的测定 | 第35页 |
| 2.10 原位杂交分析HuC,amhc,vmhc,Krox20,myoD基因在Aldh4a1纯合突变体和野生斑马鱼中表达 | 第35-38页 |
| 2.11 阿尔新兰染色分析Aldh4a1纯合突变体与野生型斑马鱼软骨发育 | 第38页 |
| 2.12 外源性视黄酸拯救Aldh4a1纯合突变体 | 第38-39页 |
| 3. 实验结果 | 第39-56页 |
| 3.1 RT-PCR、qRT-PCR分析Aldh4a1在野生型斑马鱼不同时期胚胎及成体各组织器官表达情况 | 第39-40页 |
| 3.2 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建斑马鱼基因Aldh4a1突变体 | 第40-46页 |
| 3.3 Aldh4a1 F2代纯合突变体的筛选及表型观察 | 第46-48页 |
| 3.4 Aldh4a1纯合突变体的心率降低 | 第48-49页 |
| 3.5 Aldh4a1纯合突变体的心室特异性肌球蛋白重链基因vmhc及心房特异性肌球蛋白重链基因amhc表达异常 | 第49-51页 |
| 3.6 Aldh4a1纯合突变体的神经元标记基因HuC表达量降低 | 第51-52页 |
| 3.7 共定位原位杂交表明Aldh4a1纯合突变体中体节标记基因myod、菱脑节标记基因krox20之间距离减小 | 第52-53页 |
| 3.8 阿尔新兰染色表明Aldh4a1纯合突变体咽弓软骨发育异常且胸鳍缺失 | 第53-55页 |
| 3.9 外源性视黄酸能够拯救Aldh4a1纯合突变体的表型 | 第55-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-58页 |
| 5. 小结 | 第58-59页 |
| 第二章 运用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除斑马鱼Cldn7基因 | 第59-68页 |
| 1. 前言 | 第59-61页 |
| 2. 实验材料及方法 | 第61-62页 |
| 3. 实验结果与讨论 | 第62-68页 |
| 3.1 RT-PCR、qRT-PCR分析Cldn7b在野生型斑马鱼不同时期胚胎表达情况 | 第62页 |
| 3.2 斑马鱼基因Cldn7b纯合突变体的构建 | 第62-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第72页 |
