| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 黑暗链霉菌简介 | 第11-14页 |
| 1.1.1 暗霉素的发现 | 第11页 |
| 1.1.2 暗霉素结构与理化性质 | 第11-13页 |
| 1.1.3 暗霉素主要成分药理及应用 | 第13-14页 |
| 1.2 黑暗链霉菌研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 菌种改良 | 第14-15页 |
| 1.2.2 发酵控制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 提取精制 | 第16页 |
| 1.2.4 生物合成基因克隆 | 第16-20页 |
| 1.3 立题依据和研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 暗霉素高产菌株选育及其发酵特性研究 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌种 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 培养基与缓冲液的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.2 孢子活计数 | 第24页 |
| 2.2.3 培养条件 | 第24页 |
| 2.2.4 耐自身代谢产物的处理 | 第24页 |
| 2.2.5 琼脂块法 | 第24页 |
| 2.2.6 相关参数测定方法 | 第24-26页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第26-32页 |
| 2.3.1 出发菌株的考察 | 第26页 |
| 2.3.2 紫外诱变处理 | 第26-27页 |
| 2.3.3 耐自身代谢产物筛选 | 第27页 |
| 2.3.4 菌株 Tt-49 生长特性考察 | 第27-29页 |
| 2.3.4.1 斜面培养时间的确定 | 第27-28页 |
| 2.3.4.2 传代对生产力稳定性的影响 | 第28页 |
| 2.3.4.3 冷藏对稳定性的影响 | 第28-29页 |
| 2.3.5 种子特性考察 | 第29-30页 |
| 2.3.5.1 种龄的确定 | 第29-30页 |
| 2.3.5.2 接种量的确定 | 第30页 |
| 2.3.6 溶氧对发酵单位的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.7 发酵代谢曲线的绘制 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 阻断妥布霉素生物合成信息流的探索 | 第33-62页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-39页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第36-37页 |
| 3.1.2 培养基 | 第37-38页 |
| 3.1.3 试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.3.1 主要溶液 | 第38页 |
| 3.1.3.2 主要生化试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-45页 |
| 3.2.1 菌种制备 | 第39页 |
| 3.2.2 链霉菌染色体 DNA 的提取 | 第39-40页 |
| 3.2.3 PCR 扩增反应 | 第40-41页 |
| 3.2.4 DNA 电泳检测 | 第41页 |
| 3.2.5 DNA 片段回收 | 第41页 |
| 3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| 3.2.7 大肠杆菌质粒转化 | 第42页 |
| 3.2.8 碱变性法微量制备质粒 | 第42-43页 |
| 3.2.9 大肠杆菌质粒的纯化 | 第43页 |
| 3.2.10 酶切酶连反应及回收 | 第43-44页 |
| 3.2.11 去磷酸化反应 | 第44页 |
| 3.2.12 接合转移及接合频率的计算 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-60页 |
| 3.3.1 S.tenebrarius Tt-49 对抗生素敏感性的考察 | 第45页 |
| 3.3.2 四环素抗性基因的克隆 | 第45-46页 |
| 3.3.3 四环素抗性重组质粒 pIJ791 的构建 | 第46-48页 |
| 3.3.3.1 pIJ791 的构建策略 | 第46-47页 |
| 3.3.3.2 pIJ791 中间质粒的酶切验证 | 第47页 |
| 3.3.3.3 pIJ791 对四环素抗性的验证 | 第47-48页 |
| 3.3.4 PCR 扩增 tobS1-tobC 上下游基因同源片段 | 第48-51页 |
| 3.3.4.1 菌株 S.tenebrarius Tt-49 基因组 DNA 的提取 | 第48-49页 |
| 3.3.4.2 PCR 引物设计 | 第49-50页 |
| 3.3.4.3 PCR 反应 | 第50-51页 |
| 3.3.5 妥布霉素阻断载体 pKC1150 的构建 | 第51-56页 |
| 3.3.5.1 穿梭载体的选择 | 第51-53页 |
| 3.3.5.2 pKC1150 的构建流程 | 第53-54页 |
| 3.3.5.3 pKC1150 中抗性片段的克隆 | 第54-55页 |
| 3.3.5.4 pKC1150 中间质粒的酶切验证 | 第55-56页 |
| 3.3.5.5 pKC1150 的鉴定及接合转移供体菌的制备 | 第56页 |
| 3.3.6 供体菌与 S.lividans TK24 间的接合转移 | 第56-57页 |
| 3.3.7 供体菌与 S.tenebrarius Tt-49 间的接合转移 | 第57-60页 |
| 3.3.7.1 孢子热激时间和温度的考察 | 第57页 |
| 3.3.7.2 孢子接合转移时间的考察 | 第57-58页 |
| 3.3.7.3 供体菌与受体菌比例的确定 | 第58页 |
| 3.3.7.4 萘啶酸和四环素覆盖时间的影响 | 第58页 |
| 3.3.7.5 接合子的初步检测 | 第58-59页 |
| 3.3.7.6 同源重组情况的预测分析 | 第59-60页 |
| 3.4 下一步工作建议 | 第60-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-62页 |
| 全文总结 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 个人简历 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-84页 |
