| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-23页 |
| 1.1 D-乳酸的理化性质、功能和用途 | 第7-8页 |
| 1.1.1 乳酸的理化性质 | 第7-8页 |
| 1.1.2 D-乳酸的功能和用途 | 第8页 |
| 1.2 乳酸的生产现状和方法 | 第8-12页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第8-9页 |
| 1.2.2 微生物发酵法 | 第9-12页 |
| 1.3 乳酸基因工程菌构建的进展和国内外研究现状 | 第12-17页 |
| 1.3.1 乳酸菌 | 第12-14页 |
| 1.3.2 大肠杆菌 | 第14-15页 |
| 1.3.3 酵母菌 | 第15-17页 |
| 1.4 谷氨酸棒杆菌中D-乳酸的生物合成 | 第17-21页 |
| 1.4.1 谷氨酸棒杆菌简介 | 第17页 |
| 1.4.2 谷氨酸棒杆菌中D-乳酸的的生物合成途径 | 第17-19页 |
| 1.4.3 谷氨酸棒杆菌中的基因敲除载体pK18mobscB和表达载体pXJM 19 | 第19-20页 |
| 1.4.4 谷氨酸棒杆菌中外源基因的导入方式 | 第20-21页 |
| 1.5 本文的主要研究背景及内容 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第23-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.3 实验药品 | 第24-26页 |
| 2.1.4 试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 革兰氏阳性菌基因组提取方法 | 第28-29页 |
| 2.2.2 质粒提取方法 | 第29-30页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第30-33页 |
| 2.2.5 DNA片段的回收纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.6 酶切体系 | 第34页 |
| 2.2.7 加A体系 | 第34-35页 |
| 2.2.8 连接体系 | 第35页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.10 大肠杆菌的转化 | 第36页 |
| 2.2.11 利用α互补筛选目的转化子 | 第36页 |
| 2.2.12 谷氨酸棒杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第36-37页 |
| 2.2.13 谷氨酸棒杆菌的接合转移 | 第37页 |
| 2.2.14 pXJM19 的传代稳定性实验 | 第37-38页 |
| 2.2.15 细胞量的测定 | 第38页 |
| 2.2.16 乳酸含量的测定 | 第38-42页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第42-60页 |
| 3.1 谷氨酸棒杆菌中基因敲除载体的构建 | 第42-49页 |
| 3.1.1 ldh1、ldh2 片段的PCR扩增 | 第42-43页 |
| 3.1.2 ldh1-ldh2 片段的PCR拼接 | 第43-44页 |
| 3.1.3 ldh1-ldh2 片段的TA克隆 | 第44-47页 |
| 3.1.4 ldh基因敲除载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.2 重组质粒转化C. glutamicum Res 167 | 第49-53页 |
| 3.2.1 单交换菌株的获得 | 第49-51页 |
| 3.2.2 双交换菌株的获得 | 第51-53页 |
| 3.3 C. glutamicum Res167 中pXJM19 载体的遗传稳定性 | 第53-56页 |
| 3.3.1 C. glutamicum Res167 代时的确定 | 第53-54页 |
| 3.3.2 C. glutamicum Res167 中pXJM 19 的传代稳定性 | 第54-56页 |
| 3.4 C. glutamicum Res167 中ldhA表达载体的构建 | 第56-60页 |
| 3.4.1 保加利亚乳杆菌中ldhA的克隆 | 第56-57页 |
| 3.4.2 ldhA片段的TA克隆 | 第57-59页 |
| 3.4.3 ldhA表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 第四章 结论与展望 | 第60-61页 |
| 4.1 主要结论 | 第60页 |
| 4.2 创新点 | 第60页 |
| 4.3 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
