| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-27页 |
| 1.1 细菌质粒的基本特征 | 第11-22页 |
| 1.1.1 质粒的复制方式 | 第11-14页 |
| 1.1.1.1 D-环复制 | 第12-13页 |
| 1.1.1.2 θ复制 | 第13页 |
| 1.1.1.3 滚环复制 | 第13-14页 |
| 1.1.2 质粒分离的稳定性 | 第14-16页 |
| 1.1.2.1 质粒沉溺系统 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 主动分配系统 | 第15页 |
| 1.1.2.3 位点特异性重组系统 | 第15-16页 |
| 1.1.3 质粒拷贝数 | 第16-22页 |
| 1.1.3.1 质粒的拷贝数 | 第16页 |
| 1.1.3.2 质粒拷贝数的控制 | 第16-22页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌的质粒研究进展 | 第22-25页 |
| 1.2.1 苏云金芽胞杆菌质粒的功能 | 第23-25页 |
| 1.2.1.1 携带杀虫晶体蛋白基因及其辅助蛋白基因 | 第23-24页 |
| 1.2.1.2 携带转座因子 | 第24页 |
| 1.2.1.3 接合转移 | 第24-25页 |
| 1.2.1.4 其它功能 | 第25页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-30页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.2 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.3 试剂、耗材和仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.3.1 试剂和耗材 | 第29页 |
| 2.1.3.2 仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 2.2.1 DNA操作 | 第30-31页 |
| 2.2.1.1 苏云金芽胞杆菌总DNA的制备 | 第30页 |
| 2.2.1.2 苏云金芽胞杆菌质粒的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.1.3 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.1.4 质粒DNA的纯化 | 第31页 |
| 2.2.1.5 DNA的体外重组操作 | 第31页 |
| 2.2.2 重组质粒的转化及转化子的筛选鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌的常规转化 | 第31页 |
| 2.2.2.2 苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第31-32页 |
| 2.2.2.3 大肠杆菌转化子的筛选 | 第32页 |
| 2.2.2.4 苏云金芽胞杆菌重组菌的筛选 | 第32页 |
| 2.2.3 普通PCR反应 | 第32页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR | 第32-33页 |
| 2.2.5 苏云金芽胞杆菌重组菌株质粒分离稳定性的测定 | 第33页 |
| 2.2.6 序列测定和分析 | 第33-34页 |
| 3 结果和分析 | 第34-52页 |
| 3.1 在不同非生物因子条件下质粒分离稳定性的探究 | 第34-40页 |
| 3.1.1 pEMB0557携带不同大小外源片段的重组质粒的构建 | 第35页 |
| 3.1.2 重组质粒在不同温度培养条件下质粒分离稳定性的测定 | 第35-37页 |
| 3.1.3 不同培养基培养条件下,由pEMB0557构建的重组质粒分离稳定性的变化探究 | 第37-40页 |
| 3.2 在不同生物因子条件下质粒分离稳定性的探究 | 第40-47页 |
| 3.2.1 构建的重组质粒在BMB171中的质粒稳定性测定 | 第40-41页 |
| 3.2.2 特异性引物的设计以及质粒标准品的构建 | 第41-44页 |
| 3.2.2.1 引物的设计以及PCR验证其特异性 | 第41-42页 |
| 3.2.2.2 质粒标准品的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.3 构建的重组质粒在BMB171中的质粒拷贝数的测定 | 第44-46页 |
| 3.2.4 小结 | 第46-47页 |
| 3.3 控制质粒pBMB28分离稳定性因子的定位 | 第47-52页 |
| 3.3.1 包含有控制质粒分离稳定性因子的克隆片段的确定 | 第47-48页 |
| 3.3.2 进一步缩小定位质粒分离稳定因子的区域 | 第48-49页 |
| 3.3.3 M片段序列的分析 | 第49-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 5 总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录A 本研究所用的工具载体物理图谱 | 第63-64页 |
| 附录B 已发表文章 | 第64页 |
