| 致谢 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-39页 |
| 绪言 | 第13-15页 |
| References | 第13-15页 |
| 第一节 G蛋白偶联受体活化过程的分子结构特征 | 第15-23页 |
| 1. G蛋白偶联受体存在多个构象 | 第15-16页 |
| 2. G蛋白偶联受体活化后的胞外区(ECL)构象变化 | 第16-17页 |
| 3. G蛋白偶联受体结合配体后跨膜区(TM)构象变化 | 第17-18页 |
| 4. G蛋白偶联受体活化后跨膜区(TM)-胞内区(ICL)构象变化 | 第18-19页 |
| 5. 偏好性信号转导 | 第19页 |
| References | 第19-23页 |
| 第二节 褪黑激素及其细胞膜受体MT1和MT2 | 第23-29页 |
| 1. 褪黑激素 | 第23页 |
| 2. 褪黑激素的结构、代谢和分泌 | 第23-25页 |
| 3. 褪黑激素受体 | 第25-27页 |
| References | 第27-29页 |
| 第三节 靶向G蛋白偶联受体的药物筛选方法进展 | 第29-39页 |
| 1. 通过分析受体配体结合 | 第29-31页 |
| 2. 通过分析受体活化和信号转导 | 第31-35页 |
| 3. 无需标记的细胞水平检测方法 | 第35页 |
| 结语 | 第35-36页 |
| References | 第36-39页 |
| 第二章 褪黑激素受体MT1的信号转导机制研究 | 第39-93页 |
| 绪论 | 第39-41页 |
| References | 第40-41页 |
| 第一节 MT1结合G蛋白Gs和Gi的分子机制研究 | 第41-62页 |
| 1.1 前言 | 第41页 |
| 1.2 材料与方法 | 第41-45页 |
| 1.2.1 材料 | 第41-42页 |
| 1.2.2 方法 | 第42-45页 |
| 1.3 结果 | 第45-55页 |
| 1.3.1 在HEK293细胞中,外源表达的褪黑激素受体MT引起cAMP水平上升 | 第45-47页 |
| 1.3.2 褪黑激素引起cAMP上升和CREB的活化是受体MT1特异的,而不是细胞特异的 | 第47-49页 |
| 1.3.3 MT1结合Gs蛋白和Gi蛋白调控cAMP水平,没有Gq的参与 | 第49-51页 |
| 1.3.4 ICL2参与了MT1结合Gs蛋白 | 第51-53页 |
| 1.3.5 IM7中NSXXNPXXY motif对MT1结合Gs蛋白有重要影响 | 第53-54页 |
| 1.3.6 Lipid rafts/caveolae对MT1结合Gs蛋白的影响 | 第54-55页 |
| 1.4 讨论 | 第55-58页 |
| Reference | 第58-62页 |
| 第二节 褪黑激素受体MT1的内吞途径研究 | 第62-81页 |
| 2.1 前言 | 第62页 |
| 2.2 材料和方法 | 第62-65页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第63-65页 |
| 2.3 结果 | 第65-74页 |
| 2.3.1 褪黑激素结合MT1能够引起受体的内吞 | 第65-66页 |
| 2.3.2 MT1的内吞定位于内含体并随后回膜 | 第66-68页 |
| 2.3.3 mel引起的MT1内吞是clathrin依赖的内吞过程 | 第68-69页 |
| 2.3.4 MT1的内吞依赖于GRK2和βarrestin2的参与 | 第69-72页 |
| 2.3.5 MT1的内吞依赖于MT1结合Gi蛋白作为前提 | 第72-73页 |
| 2.3.6 MT1活化的Gs/AC/cAMP/PKA信号通路可能参与调节MT1的内吞 | 第73-74页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第74-78页 |
| References | 第78-81页 |
| 第三节 MT1介导的ERK1/2磷酸化信号通路机制研究 | 第81-89页 |
| 3.1 前言 | 第81页 |
| 3.2 材料与方法 | 第81-83页 |
| 3.2.1 材料 | 第81-82页 |
| 3.2.2 方法 | 第82-83页 |
| 3.3 结果 | 第83-89页 |
| 3.3.1 褪黑激素活化MT1能引起细胞的MAPK/ERK信号通路 | 第83-84页 |
| 3.3.2 MT1结合Gi蛋白引起MAPK/ERK的磷酸化 | 第84-86页 |
| 3.3.3 P13K/PDK1/PKC路径参与了MT1引起的MAPK/ERK的磷酸化 | 第86-88页 |
| 3.3.4 MT1结合Gs蛋白也能引起MAPK/ERK的磷酸化 | 第88-89页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第89-91页 |
| Reference | 第91-93页 |
| 第三章 拼接肽介导的新型GPCR筛选模型的构建 | 第93-109页 |
| 1. 引言 | 第93-94页 |
| 2. 材料和方法 | 第94-97页 |
| 2.1 材料 | 第94-95页 |
| 2.2 Npu DnaE内含肽和Sel DnaE内含肽的克隆和序列分析 | 第95页 |
| 2.3 质粒构建 | 第95-96页 |
| 2.4 细胞培养和转染 | 第96页 |
| 2.5 体内反式剪接和重组蛋白的量化 | 第96-97页 |
| 2.6 蛋白免疫印迹 | 第97页 |
| 2.7 细胞-细胞融合 | 第97页 |
| 3. 结果 | 第97-103页 |
| 3.1 断裂型内含肽Sel DnaE基因的克隆和序列分析 | 第97-98页 |
| 3.2 Sel DnaE介导的体内重建 | 第98-101页 |
| 3.3 Sel DnaE内含肽在哺乳动物系统中反式剪接的特异性 | 第101-102页 |
| 3.4 Sel DnaE内含肽介导趋化因子受体CCR5依赖的细胞-细胞融合检测 | 第102-103页 |
| 4. 讨论 | 第103-106页 |
| Reference | 第106-109页 |
| 第四章 全文总结 | 第109-111页 |
| 全文总结 | 第109页 |
| 本论文的创新点 | 第109-110页 |
| 本论文的不足 | 第110-111页 |
| 发表论文与专利 | 第111页 |
