| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌研究概况 | 第10-12页 |
| 1.1.1 小麦赤霉病 | 第10页 |
| 1.1.2 小麦赤霉病菌 | 第10-11页 |
| 1.1.3 镰刀菌毒素 | 第11-12页 |
| 1.2 禾谷镰刀菌基因组学研究 | 第12-13页 |
| 1.3 限制酶介导整合(REMI)技术 | 第13-15页 |
| 1.3.1 REMI转化真菌效率的影响因素 | 第14-15页 |
| 1.3.2 REMI在真菌研究中的应用 | 第15页 |
| 1.4 禾谷镰刀菌FgNEM1基因的相关研究背景 | 第15-17页 |
| 1.5 研究的目的及意义 | 第17-19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 真菌菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 小麦材料 | 第19页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第19页 |
| 2.1.4 试剂及培养基 | 第19-21页 |
| 2.1.4.1 质粒DNA提取试剂 | 第19页 |
| 2.1.4.2 真菌基因组DNA提取试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4.3 Southern杂交相关试剂 | 第20页 |
| 2.1.4.4 原生质体转化培养基及缓冲液 | 第20页 |
| 2.1.4.5 酶及试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 载体的构建及转化 | 第21-23页 |
| 2.2.1.1 同源整合载体的构建方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1.2 回复突变载体的构建方法 | 第22页 |
| 2.2.1.3 质粒DNA提取 | 第22页 |
| 2.2.1.4 感受态细胞制备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 原生质体的制备及转化 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 原生质体制备 | 第23页 |
| 2.2.2.2 限制酶介导的转化(REMI)及转化方法优化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 转化子PCR检测 | 第24-26页 |
| 2.2.3.1 真菌基因组DNA提取 | 第24页 |
| 2.2.3.2 TAIL-PCR扩增pAN7-1插入位点旁边的序列 | 第24-26页 |
| 2.2.3.3 PCR分别检验目的基因是否发生同源重组整合 | 第26页 |
| 2.2.4 转化子Southern blot分析 | 第26-27页 |
| 2.2.5 转化子表型分析 | 第27页 |
| 2.2.6 转化子生长速度测定 | 第27页 |
| 2.2.7 转化子产孢能力分析 | 第27-28页 |
| 2.2.8 转化子田间花期单花接种 | 第28页 |
| 2.2.9 PCR扩增引物 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-46页 |
| 3.1 禾谷镰刀菌随机插入突变体库的扩建及分析 | 第29-30页 |
| 3.1.1 原生质体冷冻时间对转化效率的影响 | 第29页 |
| 3.1.2 突变体库的建立 | 第29-30页 |
| 3.2 随机插入突变体库中转化子的筛选结果及分析 | 第30-36页 |
| 3.2.1 培养性状筛选结果 | 第30-31页 |
| 3.2.2 转化子生长速度测定结果 | 第31页 |
| 3.2.3 转化子基因组DNA提取 | 第31页 |
| 3.2.4 转化子PCR检测 | 第31-32页 |
| 3.2.5 转化子Southern分析 | 第32-33页 |
| 3.2.6 TAIL-PCR扩增pAN7-1插入位点旁边的序列 | 第33-36页 |
| 3.2.6.1 M2354的TAIL-PCR结果 | 第33-34页 |
| 3.2.6.2 TAIL-PCR片段测序结果及分析 | 第34-36页 |
| 3.3 FgNEM1基因的敲除结果 | 第36-40页 |
| 3.3.1 pLH-HygB-FgNEM1载体的构建 | 第36-38页 |
| 3.3.2 缺失株△Fgnem1两翼PCR检测 | 第38-39页 |
| 3.3.3 缺失株△Fgnem1 Southern分析 | 第39-40页 |
| 3.4 FgNEM1基因功能的回复验证结果 | 第40-43页 |
| 3.4.1 回复验证载体pLH-Neo-Tet-FgNEM1的构建 | 第40-41页 |
| 3.4.2 回复转化子FgNEM1C的PCR检测 | 第41-42页 |
| 3.4.3 回复转化子FgNEM1C的Southern分析 | 第42-43页 |
| 3.5 FgNEM1基因的功能研究 | 第43-46页 |
| 3.5.1 缺失株△Fgnem1和回复突变子FgNEM1C培养性状分析 | 第43-44页 |
| 3.5.2 缺失株△Fgnem1和回复突变子FgNEM1C生长速度测定 | 第44页 |
| 3.5.3 缺失株△Fgnem1和回复突变子FgNEM1C产孢能力测定 | 第44-45页 |
| 3.5.4 缺失株△Fgnem1和回复突变子FgNEM1C致病力鉴定 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-49页 |
| 4.1 禾谷镰刀菌随机突变体库的库容分析 | 第46页 |
| 4.2 FgNEM1基因的功能分析 | 第46-47页 |
| 4.3 FgNEM1基因的回复突变分析 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
