| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| ·氟喹诺酮类药物的应用及耐药进展 | 第10-11页 |
| ·氟喹诺酮类药物应用现状 | 第10页 |
| ·氟喹诺酮类药物耐药进展 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药性检测方法研究进展 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药机理 | 第12-15页 |
| ·染色体介导的大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药机理 | 第12页 |
| ·质粒介导的大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药机理及本研究目的基因 | 第12-15页 |
| ·本研究的目的意义 | 第15页 |
| ·本研究的创新点 | 第15-16页 |
| ·本研究的技术路线 | 第16-17页 |
| 2 实验材料 | 第17-18页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第17页 |
| ·主要实验试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| 3 实验方法 | 第18-25页 |
| ·细菌纯化鉴定 | 第18页 |
| ·形态学鉴定 | 第18页 |
| ·生化鉴定 | 第18页 |
| ·致病性鉴定 | 第18页 |
| ·大肠杆菌对氟喹诺酮类药物药敏试验 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌3个PMQR基因(qnrB、qnrS、qnrD)三重PCR检测方法的建立 | 第19-23页 |
| ·三重待扩增目的基因的选择及PCR引物设计 | 第19页 |
| ·三重PCR模板制备方法的选择和优化 | 第19-20页 |
| ·单基因qnrB、qnrS和qnrD基因PCR扩增体系及可变范围确立 | 第20页 |
| ·qnrB、qnrS、qnrD基因阳性菌株鉴定 | 第20-21页 |
| ·三重PCR反应体系的优化及建立 | 第21-22页 |
| ·三重PCR检测方法特异性试验 | 第22-23页 |
| ·三重PCR检测方法灵敏度试验 | 第23页 |
| ·大肠杆菌PMQR基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr、qepA单一PCR检测 | 第23-24页 |
| ·qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA引物设计 | 第23页 |
| ·PCR模板制备 | 第23页 |
| ·单基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA PCR扩增体系 | 第23-24页 |
| ·qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA基因阳性菌株鉴定 | 第24页 |
| ·质粒介导的6种耐氟喹诺酮类药物基因qnrB、qnrS、qnrD、qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA在大肠杆菌中的检测 | 第24-25页 |
| ·用三重PCR方法检测PMQR基因qnrB、qnrS和qnrD | 第24页 |
| ·单一PCR方法检测PMQR基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA | 第24-25页 |
| ·六种PMQR基因检测结果与耐药表型检测结果比较 | 第25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-43页 |
| ·细菌纯化鉴定结果 | 第25-27页 |
| ·纯化培养及形态学鉴定结果 | 第25页 |
| ·生化鉴定结果 | 第25-27页 |
| ·致病性鉴定结果 | 第27页 |
| ·大肠杆菌对氟喹诺酮类药物药敏试验结果 | 第27-29页 |
| ·不同来源大肠杆菌耐药率检测结果 | 第27-28页 |
| ·不同地区大肠杆菌耐药率检测结果 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌3个PMQR基因(qnrB、qnrS、qnrD)三重PCR检测方法的建立 | 第29-37页 |
| ·单基因PCR最佳扩增参数及可变范围 | 第29-30页 |
| ·qnrB、qnrS、qnrD基因阳性对照测序结果及分析 | 第30-32页 |
| ·三重PCR反应体系的优化及建立 | 第32-36页 |
| ·三重PCR检测方法特异性试验结果 | 第36页 |
| ·三重PCR检测方法灵敏度试验结果 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌PMQR基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA单一PCR检测 | 第37-40页 |
| ·单基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA的PCR扩增结果 | 第37页 |
| ·耐药基因qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA阳性对照测序结果及分析 | 第37-40页 |
| ·质粒介导的6种耐氟喹诺酮类药物基因qnrB、qnrS、qnrD、qnrA、aac(6’)-Ib-cr和qepA在大肠杆菌中的检测结果 | 第40-42页 |
| ·六种PMQR基因在大肠杆菌中的检测结果与耐药表型比较 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43-50页 |
| ·大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药表型特点 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌PMQR三基因(qnrB、qnrS和qnrD)三重PCR检测方法建立 | 第44-48页 |
| ·三重PCR扩增目的耐药基因的选择 | 第45页 |
| ·关于三重PCR反应引物设计原则 | 第45页 |
| ·关于三重PCR反应模板制备方法的筛选与优化 | 第45-46页 |
| ·关于三重PCR反应方法建立和优化的影响因素 | 第46-48页 |
| ·三重PCR方法在检测PMQR基因上的优点与不足 | 第48页 |
| ·六种PMQR基因在256株大肠杆菌中的检测 | 第48-49页 |
| ·大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药率与6种PMQR基因检测结果比较 | 第49-50页 |
| ·进一步研究的建议 | 第50页 |
| 6. 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第57页 |
