| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词及注解 | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-25页 |
| 1.1 微生物药物研究概况 | 第10-12页 |
| 1.1.1 天然产物与微生物药物 | 第10页 |
| 1.1.2 微生物药物生物合成与改造 | 第10-12页 |
| 1.2 四环素类抗生素 | 第12-19页 |
| 1.2.1 四环素类抗生素简介 | 第12-14页 |
| 1.2.2 四环素类抗生素生物合成研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.2.1 四环素类抗生素生物合成基因簇的研究 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2 四环素类抗生素生物合成基因的研究 | 第15-18页 |
| 1.2.3 四环素类抗生素结构改造研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 金霉素 | 第19-22页 |
| 1.3.1 金霉素简介 | 第19-20页 |
| 1.3.2 金霉素抗菌机制与毒副作用 | 第20页 |
| 1.3.3 金霉素生物合成途径的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4 选题依据与研究内容 | 第22-25页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第22-23页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.3.1 试剂与工具酶 | 第27页 |
| 2.1.3.2 抗生素及使用浓度 | 第27-28页 |
| 2.1.3.3 溶液与缓冲液 | 第28-29页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-38页 |
| 2.2.1 菌种培养与保藏 | 第29-30页 |
| 2.2.2 金色链霉菌基因组DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第30-31页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| 2.2.5 DNA酶切反应 | 第32页 |
| 2.2.6 DNA片段回收 | 第32-33页 |
| 2.2.7 DNA酶连反应 | 第33页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.2.9 质粒转化 | 第33-34页 |
| 2.2.10 碱裂解法提取质粒DNA | 第34页 |
| 2.2.11 基因的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE溶液的配制 | 第35页 |
| 2.2.13 大肠杆菌-金色链霉菌接合转移 | 第35-36页 |
| 2.2.14 金色链霉菌摇瓶发酵 | 第36页 |
| 2.2.15 抗生素效价测定 | 第36-37页 |
| 2.2.16 次级代谢产物粗提 | 第37页 |
| 2.2.17 次级代谢产物分析 | 第37-38页 |
| 2.2.17.1 HPLC分析法 | 第37页 |
| 2.2.17.2 质谱法(MS) | 第37-38页 |
| 第三章 ctcK基因功能的研究 | 第38-51页 |
| 3.1 CtcK蛋白结构功能分析 | 第38-40页 |
| 3.1.1 CtcK蛋白序列基本性质分析 | 第38-39页 |
| 3.1.2 CtcK蛋白三维结构及功能分析 | 第39页 |
| 3.1.3 ctcK基因的克隆与表达 | 第39-40页 |
| 3.2 同源重组质粒pJTK2的构建 | 第40-43页 |
| 3.2.1 同源交换臂的扩增 | 第41-42页 |
| 3.2.2 同源重组质粒pJTK2的构建 | 第42-43页 |
| 3.3 ctcK基因缺失突变株的筛选与验证 | 第43-45页 |
| 3.3.1 接合转移 | 第43-44页 |
| 3.3.2 单交换突变株的鉴定 | 第44页 |
| 3.3.3 ctcK基因缺失突变株的筛选 | 第44-45页 |
| 3.4 SK12次级代谢产物分析 | 第45-48页 |
| 3.4.1 突变株SK12次级代谢产物的HPLC分析 | 第46页 |
| 3.4.2 突变株SK12次级代谢产物的MS分析 | 第46-48页 |
| 3.5 ctcK基因回补实验 | 第48-50页 |
| 3.5.1 回补质粒pKB12的构建与验证 | 第48-49页 |
| 3.5.2 回补突变株SK14的筛选及其代谢产物分析 | 第49-50页 |
| 3.6 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 ctcN基因功能的研究 | 第51-59页 |
| 4.1 生物信息学推测ctcN基因功能 | 第51-52页 |
| 4.2 同源重组质粒pJTN2的构建 | 第52-55页 |
| 4.2.1 同源交换臂的扩增 | 第53页 |
| 4.2.2 同源重组质粒pJTN2的构建 | 第53-55页 |
| 4.3 ctcN基因缺失突变株的筛选与验证 | 第55-57页 |
| 4.3.1 单交换突变株的鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.2 ctcN基因缺失突变株的筛选 | 第56-57页 |
| 4.4 突变株SN12次级代谢产物分析 | 第57-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 第五章 ctcJ基因功能的研究 | 第59-65页 |
| 5.1 生物信息学推测ctcJ基因功能 | 第59页 |
| 5.2 同源重组质粒pJTJ2的构建 | 第59-62页 |
| 5.2.1 同源交换臂的扩增 | 第61页 |
| 5.2.2 同源重组质粒pJTJ2的构建 | 第61-62页 |
| 5.3 ctcJ基因缺失突变株的筛选与验证 | 第62-64页 |
| 5.3.1 单交换突变株的鉴定 | 第62-63页 |
| 5.3.2 ctcJ基因缺失突变株的筛选 | 第63-64页 |
| 5.4 突变株SJ12的次级代谢产物分析 | 第64页 |
| 5.5 小结 | 第64-65页 |
| 第六章 ctcL基因功能的研究 | 第65-73页 |
| 6.1 生物信息学推测ctcL基因功能 | 第65页 |
| 6.2 同源重组质粒pJTL的构建 | 第65-69页 |
| 6.2.1 同源交换臂的扩增 | 第67页 |
| 6.2.2 同源重组质粒pJTL的构建 | 第67-69页 |
| 6.3 ctcL基因缺失突变株的筛选与验证 | 第69-71页 |
| 6.3.1 单交换突变株的鉴定 | 第69-70页 |
| 6.3.2 ctcL基因缺失突变株的筛选 | 第70-71页 |
| 6.4 突变株SL12次级代谢产物分析 | 第71页 |
| 6.5 小结 | 第71-73页 |
| 第七章 ctcO基因功能的研究 | 第73-80页 |
| 7.1 生物信息学推测ctcO基因功能 | 第73页 |
| 7.2 同源重组质粒pJTO2的构建 | 第73-77页 |
| 7.2.1 同源交换臂的扩增 | 第75页 |
| 7.2.2 同源重组质粒pJTO2的构建 | 第75-77页 |
| 7.3 ctcO基因缺失突变株的筛选与验证 | 第77-78页 |
| 7.3.1 单交换突变株的鉴定 | 第77-78页 |
| 7.3.2 ctcO基因缺失突变株的筛选 | 第78页 |
| 7.4 突变株SO12次级代谢产物分析 | 第78-79页 |
| 7.5 小结 | 第79-80页 |
| 全文总结 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 个人简历 | 第90页 |
