甘蓝型油菜激活标签突变体库的创建
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9页 |
| 1 构建植物突变体库的主要方法 | 第9-18页 |
| 1.1 理化诱变 | 第10页 |
| 1.2 插入突变 | 第10-12页 |
| 1.2.1 转座子插入法 | 第11页 |
| 1.2.2 T-DNA插入法 | 第11-12页 |
| 1.3 激活标签技术 | 第12-14页 |
| 1.3.1 激活标签技术的优势 | 第13页 |
| 1.3.2 激活标签的应用 | 第13-14页 |
| 1.4 获得侧翼序列的方法 | 第14-17页 |
| 1.4.1 连接介导PCR法 | 第15页 |
| 1.4.2 TAIL-PCR法 | 第15-17页 |
| 1.4.3 反向PCR法 | 第17页 |
| 1.5 本研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第18页 |
| 2.1.3 转化培养基的配制 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-30页 |
| 2.2.1 甘蓝型油菜激活标签体系建立 | 第19-22页 |
| 2.2.2 T-DNA插入位点侧翼序列的分离 | 第22-26页 |
| 2.2.3 RT-PCR分析 | 第26-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-43页 |
| 3.1 激活标签载体转化大肠杆菌 | 第30页 |
| 3.2 PCR阳性检测转基因油菜 | 第30-31页 |
| 3.3 转基因植株的表型观察 | 第31-33页 |
| 3.4 侧翼序列分析 | 第33-38页 |
| 3.4.1 TAIL-PCR法和连接介导PCR法 | 第33-35页 |
| 3.4.2 T-DNA左边界序列剪切位点分析 | 第35-36页 |
| 3.4.3 T-DNA插入的定位及插入位点分析 | 第36-38页 |
| 3.5 RT-PCR分析 | 第38-43页 |
| 3.5.1 RNA的提取和检测 | 第38页 |
| 3.5.2 激活标签的表达分析 | 第38-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 影响油菜转化效率的因素 | 第43页 |
| 4.2 侧翼序列分离方法的探讨 | 第43-44页 |
| 4.3 T-DNA插入整合分析 | 第44页 |
| 4.4 激活标签的激活作用 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 1.1 SDS碱裂解法制备质粒DNA | 第56-57页 |
| 1.2 大肠杆菌转化 | 第57-58页 |
| 1.3 测序 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
