| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 细菌中普遍存在的新型的第二信使——c-di-GMP | 第11-20页 |
| 1.1.1 生物体内的第二信使 | 第11页 |
| 1.1.2 一种新型的第二信使——c-di-GMP | 第11-12页 |
| 1.1.3 c-di-GMP的代谢过程 | 第12-13页 |
| 1.1.4 c-di-GMP的合成：GGDEF结构域 | 第13-15页 |
| 1.1.5 c-di-GMP的降解：EAL或HD-GYP结构域 | 第15-16页 |
| 1.1.6 c-di-GMP信号传导系统的作用机制 | 第16-18页 |
| 1.1.7 c-di-GMP信号传导系统的生理机能 | 第18-19页 |
| 1.1.8 GGDEF和EAL结构域的多样性 | 第19-20页 |
| 1.2 立题依据和研究意义 | 第20-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-30页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 供试质粒 | 第23-25页 |
| 2.1.3 供试引物 | 第25页 |
| 2.1.4 培养基 | 第25-28页 |
| 2.1.5 试剂 | 第28-30页 |
| 2.2 实验过程 | 第30-39页 |
| 2.2.1 蜡样芽孢杆菌 0-9 基因组DNA重测序及生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 2.2.2 构建敲除载体 | 第31-33页 |
| 2.2.3 遗传转化 | 第33-35页 |
| 2.2.4 基因缺失菌株的筛选及验证 | 第35页 |
| 2.2.5 基因缺失菌株的生物学特征测定以及比较 | 第35-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-65页 |
| 3.1 蜡样芽孢杆菌 0-9 基因组DNA的重测序及生物信息学分析 | 第39-45页 |
| 3.2 构建敲除载体 | 第45-47页 |
| 3.2.1 目的基因上下游片段的扩增 | 第45-47页 |
| 3.2.2 敲除载体的构建 | 第47页 |
| 3.3 遗传转化 | 第47-50页 |
| 3.3.1 热击转化E. coli pir116 | 第47-48页 |
| 3.3.2 电击转化E. coli GM2163 | 第48-50页 |
| 3.3.3 电击转化到 0-9 感受态中 | 第50页 |
| 3.4 基因缺失菌株的获得 | 第50-53页 |
| 3.4.1 利用蓝白斑筛选获得基因缺失菌株 | 第50-51页 |
| 3.4.2 验证基因缺失突变株 | 第51-53页 |
| 3.5 野生型 0-9 与基因缺陷型菌株的生物学特征测定及比较 | 第53-65页 |
| 3.5.1 生长情况的测定及比较 | 第53-54页 |
| 3.5.2 胞外多糖产生能力及菌落形态测定 | 第54-55页 |
| 3.5.3 胞外酶产生能力的测定及比较 | 第55-59页 |
| 3.5.4 氧化胁迫性测定及比较 | 第59-60页 |
| 3.5.5 运动能力测定及比较 | 第60-62页 |
| 3.5.6 生物薄膜形成能力测定及比较 | 第62-64页 |
| 3.5.7 总蛋白差异比较 | 第64-65页 |
| 4 结论 | 第65-69页 |
| 5 讨论 | 第69-73页 |
| 6 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
