| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 缩略词表 | 第6-7页 |
| 技术路线 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-22页 |
| ·miRNAs研究现状 | 第13-20页 |
| ·植物microRNA的形成机理 | 第13-14页 |
| ·植物microRNA分子的特征 | 第14-15页 |
| ·植物microRNA基因鉴定 | 第15-17页 |
| ·组织特异性克隆 | 第15-16页 |
| ·计算机分析 | 第16页 |
| ·对表达序列标签(EST)的分析 | 第16-17页 |
| ·植物microRNA的表达 | 第17页 |
| ·植物microRNA靶基因 | 第17-18页 |
| ·植物miRNA的生理功能 | 第18-20页 |
| ·抗生物逆境胁迫 | 第19页 |
| ·抗非生物逆境胁迫 | 第19-20页 |
| ·研究的目的意义 | 第20-22页 |
| 2 胡杨microRNAs前体的克隆与分析 | 第22-32页 |
| ·材料与方法 | 第22-27页 |
| ·植物材料 | 第22-23页 |
| ·仪器和试剂 | 第23页 |
| ·培养基及抗生素 | 第23页 |
| ·胡杨microRNA前体的分离 | 第23-26页 |
| ·胡杨基因组DNA提取 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·目的片段的回收与纯化 | 第25-26页 |
| ·目的片段连入载体 | 第26页 |
| ·转化 | 第26页 |
| ·大肠杆菌单克隆送测 | 第26页 |
| ·胡杨microRNA前体丛因分析 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-31页 |
| ·胡杨microRNA前体DNA序列比对 | 第27-29页 |
| ·胡杨microRNA前体二级结构分析 | 第29-31页 |
| ·小结与讨论 | 第31-32页 |
| 3 胡杨microRNAs前体与成熟体的表达分析 | 第32-45页 |
| ·材料与方法 | 第32-38页 |
| ·植物材料处理 | 第32页 |
| ·不同胁迫处理下胡杨microRNA前体及成熟体的实时定量分析 | 第32-38页 |
| ·CTAB-PVP法提取胡杨总RNA | 第32-33页 |
| ·胡杨microRNA前体及成熟体的实时定量RT-PCR引物设计 | 第33-36页 |
| ·胡杨microRNA前体及成熟体的反转录(RT)反应 | 第36-37页 |
| ·胡杨microRNA前体及成熟体的实时荧光定量PCR反应 | 第37页 |
| ·PCR数据的标准化与Treeview分析 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-43页 |
| ·胡杨microRNA前体及成熟体的实时荧光定量数据处理 | 第38-41页 |
| ·胡杨microRNA前体及成熟体的Treeview分析 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| ·胡杨miRNA前体与成熟体表达的相互关系 | 第43页 |
| ·胡杨不同逆境响应miRNA成熟体的表达 | 第43-45页 |
| 4 胡杨microRNAs靶基因预测及克隆 | 第45-53页 |
| ·胡杨microRNA靶基因预测 | 第45-48页 |
| ·材料与方法 | 第45页 |
| ·数据库的搜索 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-48页 |
| ·胡杨microRNA靶基因克隆 | 第48-53页 |
| ·实验材料与方法 | 第48-50页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·仪器和试剂 | 第48页 |
| ·胡杨RNA提取及第一链cDNA的合成 | 第48-49页 |
| ·PCR扩增 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| 5 胡杨microRNAs靶基因确定及定量分析 | 第53-63页 |
| ·胡杨microRNA靶丛因确定 | 第53-59页 |
| ·实验材料与方法 | 第53-57页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·仪器和试剂 | 第53页 |
| ·胡杨总RNA提取 | 第53页 |
| ·5'-RACE引物设计 | 第53-54页 |
| ·5'-RACE | 第54-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-59页 |
| ·胡杨microRNA靶基因的实时荧光定量 | 第59-61页 |
| ·实验材料与方法 | 第59-60页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·仪器和试剂 | 第59页 |
| ·靶基因的实时荧光定量引物设计 | 第59页 |
| ·胡杨RNA提取及第一链cDNA的合成 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 6 胡杨miR393a转基因及功能验证 | 第63-73页 |
| ·载体构建 | 第63-67页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-67页 |
| ·加入酶切位点的目的基因 | 第64页 |
| ·DNA的回收与纯化 | 第64页 |
| ·目的片段与pMD19-T Simple Vector载体连接 | 第64页 |
| ·转化大肠杆菌感受态 | 第64页 |
| ·大肠杆菌阳性克隆的PCR鉴定 | 第64页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第64-65页 |
| ·酶切及连接体系 | 第65页 |
| ·连接产物的PCR检测 | 第65-66页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备及质粒向农杆菌EHA105的转化 | 第66页 |
| ·农杆菌菌液PCR检测 | 第66-67页 |
| ·农杆菌的活化与培养 | 第67页 |
| ·胡杨Peu-MIR393a基因转化拟南芥 | 第67-68页 |
| ·实验材料 | 第67页 |
| ·植物材料和培养基 | 第67页 |
| ·拟南芥的种植与管理 | 第67页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥转化(花粉管滴定法) | 第67-68页 |
| ·转基因植株的检测 | 第68页 |
| ·潮霉素抗性检测 | 第68页 |
| ·T1代拟南芥植株的获得 | 第68页 |
| ·T3代转基因拟南芥植株的盐胁迫处理 | 第68页 |
| ·AtmiR393a靶基因预测 | 第68页 |
| ·结果分析 | 第68-71页 |
| ·转基因植株的检测 | 第68-69页 |
| ·潮霉素抗性检测 | 第68-69页 |
| ·T1代转丛因拟南芥的PCR鉴定 | 第69页 |
| ·转基因拟南芥盐处理 | 第69-71页 |
| ·miR393a在拟南芥中的靶基因预测 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 7 结论与展望 | 第73-75页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| ·展望 | 第74-75页 |
| ·创新点 | 第74页 |
| ·进一步研究的内容 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 个人简介 | 第80页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第80-81页 |
| 导师简介 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
