| 论文缩略词表 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第11-20页 |
| 第一章 肉毒毒素的研究 | 第11-17页 |
| 1.1 肉毒梭菌 | 第11页 |
| 1.2 肉毒毒素结构与致病机理 | 第11-13页 |
| 1.3 肉毒中毒途径与诊断 | 第13-14页 |
| 1.4 肉毒中毒预防与治疗 | 第14-16页 |
| 1.5 未来与展望 | 第16-17页 |
| 第二章 跨膜肽与绿色荧光的研究 | 第17-20页 |
| 1.1 入胞生物技术 | 第17页 |
| 1.2 跨膜肽TAT | 第17-18页 |
| 1.3 绿色荧光GFP | 第18-19页 |
| 1.4 研究意义 | 第19页 |
| 1.5 课题内容 | 第19-20页 |
| 第二篇 研究内容 | 第20-46页 |
| 第一章 TAT-ScFv的构建及工程菌发酵 | 第20-30页 |
| 1.1 材料 | 第20-22页 |
| 1.1.1 菌种 | 第20页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 1.1.3 溶液配制 | 第20-21页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.2 方法 | 第22-26页 |
| 1.2.1 基因片段ScFv的获取 | 第22-23页 |
| 1.2.2 ScFv基因和载体质粒pET28a-TAT的酶切、回收及连接 | 第23-24页 |
| 1.2.3 感受态细胞的制备及转化 | 第24页 |
| 1.2.4 重组质粒pET28a-TAT-ScFv的PCR、双酶切鉴定 | 第24页 |
| 1.2.5 表达菌E.coliBL21(DE3)的转化、诱导优化及鉴定 | 第24-25页 |
| 1.2.6 TAT-ScFv的中试发酵 | 第25-26页 |
| 1.3 结果 | 第26-29页 |
| 1.3.1 重组表达质粒(pET28a-TAT-ScFv)PCR鉴定 | 第26页 |
| 1.3.2 重组表达质粒(pET28a-TAT-ScFv)双酶切鉴定 | 第26页 |
| 1.3.3 重组表达质粒(pET28a-TAT-ScFv)测序鉴定 | 第26-27页 |
| 1.3.4 重组蛋白(TAT-ScFv)表达鉴定 | 第27页 |
| 1.3.5 重组蛋白(TAT-ScFv)表达条件的优化结果 | 第27-28页 |
| 1.3.6 发酵结果 | 第28-29页 |
| 1.4 讨论 | 第29页 |
| 1.5 小结 | 第29-30页 |
| 第二章 TAT-ScFv的纯化及鉴定分析 | 第30-36页 |
| 1.1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1.1 试剂配制 | 第30-31页 |
| 1.1.2 纯化介质 | 第31页 |
| 1.2 方法 | 第31-33页 |
| 1.2.1 Cu~(2+)Chelating Sepharose~(TM) Fast Flow 层析纯化蛋白 | 第31页 |
| 1.2.2 HiTrap Protein A HP层析纯化蛋白 | 第31页 |
| 1.2.3 BCA法测定重组蛋白浓度 | 第31-32页 |
| 1.2.4 薄层扫描测定重组蛋白纯度 | 第32页 |
| 1.2.5 TAT-ScFv的蛋白免疫印记分析(Western blot) | 第32页 |
| 1.2.6 TAT-ScFv蛋白亲和常数测定 | 第32-33页 |
| 1.3 结果 | 第33-35页 |
| 1.3.1 TAT-ScFv纯化结果 | 第33页 |
| 1.3.2 蛋白浓度测定 | 第33-34页 |
| 1.3.3 蛋白纯度测定 | 第34页 |
| 1.3.4 Western blot分析 | 第34页 |
| 1.3.5 TAT-ScFv亲和常数测定 | 第34-35页 |
| 1.4 讨论 | 第35页 |
| 1.5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 TAT-ScFv的活性研究 | 第36-46页 |
| 1.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 1.1.1 材料 | 第36页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第36-37页 |
| 1.2 方法 | 第37-40页 |
| 1.2.1 抗体内毒素测定 | 第37页 |
| 1.2.2 特异性绿色荧光标记实验 | 第37-39页 |
| 1.2.3 小鼠乙酰胆碱酶联免疫分析 | 第39-40页 |
| 1.2.4 动物实验 | 第40页 |
| 1.3 结果 | 第40-44页 |
| 1.3.1 TAT-ScFv蛋白内毒素含量 | 第40-41页 |
| 1.3.2 特异性绿色荧光标记 | 第41-43页 |
| 1.3.3 小鼠乙酰胆碱酶联免疫分析 | 第43-44页 |
| 1.3.4 小鼠模型实验 | 第44页 |
| 1.4 讨论 | 第44-45页 |
| 1.5 小结 | 第45-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
