英文缩略词表 | 第8-11页 |
中文摘要 | 第11-16页 |
英文摘要 | 第16-22页 |
一、前言 | 第23-27页 |
二、实验 | 第27-84页 |
实验一 芍芪多苷对猪血清诱导的免疫性肝纤维化的作用 | 第27-56页 |
1 实验材料 | 第27-31页 |
1.1 动物 | 第27页 |
1.2 药物与试剂 | 第27-30页 |
1.3 仪器与设备 | 第30-31页 |
2 实验方法 | 第31-42页 |
2.1 猪血清诱导大鼠免疫性肝纤维化模型的建立及给药 | 第31-32页 |
2.1.1 免疫性肝纤维化模型的制备 | 第31页 |
2.1.2 动物分组及处理 | 第31-32页 |
2.2 肝脏指数和脾脏指数的测定 | 第32页 |
2.3 ALT、AST 活性测定 | 第32页 |
2.4 血清总蛋白含量的测定 | 第32页 |
2.5 肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量的测定 | 第32页 |
2.6 血清肝纤维化标志物的测定 | 第32-35页 |
2.6.1 血清透明质酸(HA)含量的测定 | 第33页 |
2.6.2 血清层粘连蛋白(LN)含量的测定 | 第33-34页 |
2.6.3 血清III 型前胶原(PCIII)含量的测定 | 第34页 |
2.6.4 血清IV 型胶原(CIV)含量的测定 | 第34-35页 |
2.7 抗氧化物酶和脂质过氧化产物的测定 | 第35-36页 |
2.7.1 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 | 第35页 |
2.7.2 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性测定 | 第35页 |
2.7.3 丙二醛(MDA)含量测定 | 第35-36页 |
2.8 前列腺素E2(PGE2)含量的测定 | 第36页 |
2.9 肝脏病理组织学观察及评分标准 | 第36-37页 |
2.10 大鼠HSC 的分离与培养 | 第37-38页 |
2.11 原代HSC 增殖实验的检测方法 | 第38页 |
2.12 Western blot 检测肝脏的PDGFR-β、Gαs、Gαi-1、Gαi-2、Gαi-3 蛋白和磷酸化ERK1/2、p38、JNK 的表达 | 第38-41页 |
2.12.1 肝组织蛋白的提取 | 第38页 |
2.12.2 蛋白定量 | 第38-39页 |
2.12.3 Western blot 操作步骤 | 第39-41页 |
2.13 统计学处理 | 第41-42页 |
3 结果 | 第42-54页 |
3.1 SQDG 对猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠肝脏指数、脾脏指数的影响 | 第42页 |
3.2 SQDG 对免疫性肝纤维化大鼠血清转氨酶的影响 | 第42-43页 |
3.3 SQDG 对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢的影响 | 第43-45页 |
3.3.1 SQDG 对免疫性肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCIII 和CIV 含量的影响 | 第43页 |
3.3.2 SQDG 对免疫性肝纤维化大鼠肝脏Hyp 含量的影响 | 第43-45页 |
3.4 SQDG 对免疫性肝纤维化大鼠肝脏病理组织学的影响 | 第45-48页 |
3.4.1 HE 染色 | 第45页 |
3.4.2 Masson 胶原染色 | 第45-48页 |
3.5 SQDG 对免疫性肝纤维化大鼠肝匀浆MDA 含量, SOD 和GSH-Px 活性的影响 | 第48页 |
3.6 SQDG 对免疫性肝纤维化大鼠血清PGE2 含量的影响 | 第48-49页 |
3.7 SQDG 对猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠HSC 增殖的影响 | 第49-50页 |
3.8 SQDG 对免疫性肝纤维化大鼠肝组织血小板衍生生长因子受体β型(PDGFR-β表达的影响 | 第50页 |
3.9 免疫性肝纤维化大鼠肝组织ERK1 | 第50-52页 |
3.10 免疫性肝纤维化大鼠肝组织Gαs、Gαi 蛋白表达的变化及SQDG 的作用 | 第52-54页 |
4 小结 | 第54-56页 |
实验二 芍芪多苷主要成分芍药苷抑制肝星状细胞增殖的分子机制 | 第56-84页 |
1 实验材料 | 第56-58页 |
1.1 细胞株 | 第56-57页 |
1.2 药物与试剂 | 第57页 |
1.3 仪器与设备 | 第57-58页 |
2 实验方法 | 第58-62页 |
2.1 HSC-T6 的增殖实验 | 第58-59页 |
2.2 HSC-T6 cAMP 含量的测定 | 第59-60页 |
2.2.1 样品制备 | 第59页 |
2.2.2 cAMP 的测定 | 第59-60页 |
2.3 Western blot 法检测HSC-T6 COX-2、ERK1/2、p-ERK1/2 和 G 蛋白的表达 | 第60-61页 |
2.3.1 细胞样品的制备 | 第60页 |
2.3.2 Western blot 检测方法 | 第60-61页 |
2.4 蛋白激酶A(PKA)活性的测定 | 第61页 |
2.5 统计学处理 | 第61-62页 |
3 结果 | 第62-82页 |
3.1 Pae 对rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 增殖的影响 | 第62-63页 |
3.2 rrPDGF-BB 刺激HSC-T6 COX-2 表达的变化与增殖反应的关系及Pae 的作用 | 第63-67页 |
3.2.1 rrPDGF-BB 刺激HSC-T6 COX-2 表达水平的变化 | 第63-65页 |
3.2.2 选择性COX-2 抑制剂NS-398 对rrPDGF-BB 刺激HSC-T6 增殖的影响 | 第65页 |
3.2.3 Pae 对rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 COX-1 和COX-2 表达的影响 | 第65-67页 |
3.3 rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 ERK1/2 通路的变化及对COX-2 表达的影响 | 第67-71页 |
3.3.1 rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 ERK1/2 磷酸化水平的变化 | 第67-68页 |
3.3.2 Pae 对rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 ERK1/2 磷酸化水平的影响 | 第68-69页 |
3.3.3 MEK1/2 特异性的抑制剂 U0126 对 rrPDGF-BB 刺激的 HSC-T6 ERK1/2 磷酸化水平和COX-2 表达的影响及Pae 的作用 | 第69-71页 |
3.4 rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 G 蛋白-AC-cAMP 通路的变化及Pae 的作用 | 第71-79页 |
3.4.1 rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 G 蛋白表达水平的变化 | 第71-73页 |
3.4.2 rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 cAMP 水平的变化 | 第73-74页 |
3.4.3 Pae 对rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 G 蛋白表达的影响 | 第74-76页 |
3.4.4 Pae 对rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 cAMP 水平的影响 | 第76-77页 |
3.4.5 rrPDGF-BB 诱导HSC-T6 G 蛋白-AC-cAMP 的变化与增殖反应的关系 | 第77-79页 |
3.5 rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 Gi 蛋白-AC-cAMP 通路与ERK1/2通路的关系 | 第79-82页 |
3.5.1 PT 对 rrPDGF-BB 刺激的 HSC-T6 ERK1/2 通路的影响 | 第79-80页 |
3.5.2 U0126 对 rrPDGF-BB 刺激的 HSC-T6 Gαi 蛋白表达的影响 | 第80-81页 |
3.5.3 U0126 对rrPDGF-BB 刺激的HSC-T6 cAMP 水平和PKA 活性的影响 | 第81-82页 |
4 小结 | 第82-84页 |
三、讨论 | 第84-97页 |
四、结论 | 第97-98页 |
五、本研究的不足及今后工作展望 | 第98-99页 |
参考文献 | 第99-111页 |
附录 | 第111-114页 |
致谢 | 第114-116页 |
综述:肝星状细胞信号转导机制及可能的药物作用新靶点 | 第116-134页 |