| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-38页 |
| 第一章 植物次生萜类物质及其代谢工程研究进展 | 第14-36页 |
| 1 植物次生代谢物质 | 第14-15页 |
| 2 萜类化合物的合成及其功能 | 第15-24页 |
| 2.1 萜类化合物的种类及分布 | 第15页 |
| 2.2 萜类化合物的生物合成途径及其调控 | 第15-18页 |
| 2.2.1 存在于细胞质中的MVA途径 | 第16页 |
| 2.2.2 存在于质体中的DXP途径 | 第16-18页 |
| 2.3 萜类生物合成途径中的关键酶 | 第18-24页 |
| 2.3.1 Ⅰ类酶 | 第19-21页 |
| 2.3.2 Ⅱ类酶 | 第21-24页 |
| 3 萜类化合物的生理生态功能及经济价值 | 第24-30页 |
| 3.1 影响萜类化合物产生的因素 | 第24页 |
| 3.2 萜类化合物的生理功能 | 第24-25页 |
| 3.3 萜类化合物在生态系统中的作用 | 第25-28页 |
| 3.3.1 增强植物的抗病菌能力 | 第25-26页 |
| 3.3.2 对植食性昆虫的作用 | 第26-28页 |
| 3.3.3 化感作用 | 第28页 |
| 3.4 萜类化合物的经济价值 | 第28-30页 |
| 3.4.1 农业上是良好的除草剂和天然杀虫剂 | 第28-29页 |
| 3.4.2 工业上是天然香料的重要来源 | 第29页 |
| 3.4.3 医药领域是药物的有效成分 | 第29-30页 |
| 4 萜类化合物的代谢工程研究进展 | 第30-34页 |
| 4.1 单萜 | 第30-31页 |
| 4.2 倍半萜 | 第31-32页 |
| 4.3 双萜 | 第32页 |
| 4.4 三萜 | 第32-33页 |
| 4.5 四萜 | 第33-34页 |
| 5 展望 | 第34-36页 |
| 本研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 第二部分 研究报告 | 第38-92页 |
| 第二章 大豆DXS基因(GmDXS1)和DXR基因(GmDXRs)的克隆及表达分析 | 第38-64页 |
| 1 材料和方法 | 第39-45页 |
| 1.1 植物材料 | 第39页 |
| 1.2 材料处理 | 第39页 |
| 1.3 菌株和载体 | 第39-40页 |
| 1.4 方法与步骤 | 第40-45页 |
| 1.4.1 大豆基因组DNA的提取 | 第40页 |
| 1.4.2 大豆总RNA的提取和纯化 | 第40页 |
| 1.4.3 cDNA第一链的合成 | 第40页 |
| 1.4.4 GmDXS1、GmDXR1、GmDXR2基因cDNA的克隆 | 第40-41页 |
| 1.4.5 Southern杂交 | 第41-42页 |
| 1.4.6 半定量RT-PCR分析 | 第42页 |
| 1.4.7 转基因植物表达载体的构建 | 第42页 |
| 1.4.8 农杆菌介导法转化烟草 | 第42-43页 |
| 1.4.9 转基因烟草植株的分子检测 | 第43页 |
| 1.4.10 GmDXS1、GmDXRs基因在烟草中亚细胞定位的激光共聚焦扫描显微镜观察 | 第43页 |
| 1.4.11 转基因烟草腺毛密度的统计 | 第43页 |
| 1.4.12 转基因植株光合色素含量的测定 | 第43页 |
| 1.4.13 转基因烟草激素含量的测定 | 第43-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-61页 |
| 2.1 GmDXS1全长cDNA的克隆及序列分析 | 第45-47页 |
| 2.2 GmDXR1、GmDXR2全长cDNA的克隆及序列分析 | 第47-50页 |
| 2.3 GmDXS1、GmDXR1和GmDXR2的Southern blot分析 | 第50-51页 |
| 2.4 GmDXS1、GmDXR1和GmDXR2的表达分析 | 第51-53页 |
| 2.4.1 组织表达分析 | 第51页 |
| 2.4.2 热胁迫诱导表达分析 | 第51-53页 |
| 2.5 GmDXS1、GmDXR1和GmDXR2基因在烟草中的异源表达 | 第53-61页 |
| 2.5.1 植物表达载体的构建 | 第53页 |
| 2.5.2 转基因烟草的获得及分子检测 | 第53-57页 |
| 2.5.3 GmDXS1、GmDXR1和GmDXR2基因的亚细胞定位 | 第57-58页 |
| 2.5.4 GmDXS1转基因烟草叶片腺毛密度统计 | 第58-59页 |
| 2.5.5 转基因植株光合色素及激素含量的测定 | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| 3.1 大豆GmDXS1属于Ⅰ类DXS基因,且行使"看家基因"的功能 | 第61页 |
| 3.2 大豆中有两个DXR基因 | 第61-62页 |
| 3.3 GmDXS1、GmDXR1和GmDXR2基因在烟草中的过量表达导致抑制现象 | 第62-64页 |
| 第三章 大豆萜类合酶(GmTPS)基因的克隆、表达分析及功能鉴定 | 第64-92页 |
| 1 材料和方法 | 第65-70页 |
| 1.1 植物材料 | 第65页 |
| 1.2 材料处理 | 第65页 |
| 1.3 菌株和载体 | 第65页 |
| 1.4 方法与步骤 | 第65-70页 |
| 1.4.1 大豆基因组DNA的提取 | 第65页 |
| 1.4.2 大豆总RNA的提取和纯化 | 第65页 |
| 1.4.3 cDNA第一链的合成 | 第65页 |
| 1.4.5 Southern杂交 | 第65页 |
| 1.4.6 半定量RT-PCR分析 | 第65-66页 |
| 1.4.7 GateWay体系构建植物表达载体 | 第66页 |
| 1.4.8 农杆菌介导法转化烟草 | 第66页 |
| 1.4.9 转基因烟草植株的分子检测 | 第66页 |
| 1.4.10 GmTPS基因在烟草中亚细胞定位的激光共聚焦扫描显微镜观察 | 第66页 |
| 1.4.11 转基因烟草植株挥发性物质的抑菌作用 | 第66-67页 |
| 1.4.12 转基因烟草光合特性的测定 | 第67页 |
| 1.4.13 转基因烟草的耐热性分析 | 第67-69页 |
| 1.4.14 转基因烟草植株对斜纹夜蛾幼虫的影响 | 第69页 |
| 1.4.15 GmTPS基因在E.coli中的表达 | 第69-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-89页 |
| 2.1 GmTPS全长cDNA的克隆 | 第70页 |
| 2.2 序列分析及系统进化分析 | 第70-73页 |
| 2.3 Southern Blot分析 | 第73页 |
| 2.4 GmTPS基因的表达分析 | 第73-76页 |
| 2.4.1 组织表达分析 | 第73-74页 |
| 2.4.2 GmTPS在不同生物和非生物胁迫下的诱导表达分析 | 第74-76页 |
| 2.5 GmTPS基因在烟草中的过量表达 | 第76-86页 |
| 2.5.1 用GateWay体系构建植物表达载体 | 第76页 |
| 2.5.2 转基因植株的获得及分子检测(PCR、Southern、RT-PCR) | 第76-79页 |
| 2.5.3 GmTPS基因的亚细胞定位 | 第79页 |
| 2.5.4 转基因植株的抑菌作用 | 第79-80页 |
| 2.5.5 转基因植株对斜纹夜蛾幼虫的影响 | 第80-82页 |
| 2.5.6 转基因植株对热胁迫的响应的探讨 | 第82-86页 |
| 2.6 GmTPS基因在E.coli中的表达 | 第86-89页 |
| 2.6.1 原核表达载体的构建 | 第86-88页 |
| 2.6.2 GmTPS基因在E.coli中的诱导表达 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-92页 |
| 3.1 大豆TPS合酶基因缺乏保守的RRx_8W结构域 | 第89页 |
| 3.2 大豆TPS合酶属于Tps-g亚家族 | 第89-90页 |
| 3.3 转GmTPS基因植株对斜纹夜蛾幼虫有显著的驱避和生长抑制作用 | 第90页 |
| 3.4 对类异戊二烯"抗热性"假说的探讨 | 第90-92页 |
| 全文结论 | 第92-94页 |
| 本研究创新之处 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-114页 |
| 附录 | 第114-120页 |
| 攻读博士期间发表及待发表的论文 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
