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微型化生物人工肝的低温保存及传质研究

致谢第5-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-9页
缩略词表第13-15页
前言第15-16页
第一章 文献综述第16-28页
    1.1 生物人工肝概述第16-17页
    1.2 肝细胞的低温保存和超低温保存第17-24页
        1.2.1 低温保存及其保护剂第18-21页
        1.2.2 低温损伤机理第21-23页
        1.2.3 超低温保存第23-24页
    1.3 中空纤维型生物人工肝的传质研究第24-27页
        1.3.1 反应器传质特点及其研究现状第24-25页
        1.3.2 中空纤维膜扩散系数的获得方法第25-26页
        1.3.3 微电极技术及其在传质检测中的应用第26-27页
    1.4 研究思路第27-28页
第二章 材料与方法第28-39页
    2.1 动物第28页
    2.2 试剂与器材第28-29页
        2.2.1 主要试剂第28页
        2.2.2 主要器材第28-29页
    2.3 培养基与所用溶液配方第29-30页
        2.3.1 大鼠肝细胞培养基第29页
        2.3.2 低温保存培养基第29-30页
        2.3.3 4×浓缩培养基第30页
        2.3.4 磷酸缓冲液(PBS)第30页
        2.3.5 细胞洗涤培养基第30页
    2.4 大鼠肝细胞收获方法第30页
    2.5 细胞培养方法第30-31页
        2.5.1 单层贴壁培养第30-31页
        2.5.2 中空纤维凝胶包埋培养第31页
        2.5.3 中空纤维柱状聚集体培养第31页
    2.6 低温保存方法第31页
    2.7 超低温保存方法第31-32页
    2.8 细胞相关功能分析第32-34页
        2.8.1 细胞活率检测第32页
        2.8.2 尿素含量分析第32页
        2.8.3 白蛋白分析第32页
        2.8.4 线粒体膜电位检测第32-33页
        2.8.5 活性氧自由基检测第33页
        2.8.6 胞内谷胱甘肽测定第33页
        2.8.7 胞质内游离钙离子浓度(Ca~(2+))测定第33页
        2.8.8 细胞CYP 450活性测定第33-34页
        2.8.9 胞内海藻糖浓度测定第34页
        2.8.10 PCR基因检测第34页
        2.8.11 胶原凝胶收缩率测定第34页
    2.9 中空纤维膜形貌及渗透特性表征第34-35页
        2.9.1 扫描电极观察中空纤维膜形貌第34页
        2.9.2 中空纤维膜渗透特性表征第34-35页
    2.10 传质相关测定及分析方法第35-38页
        2.10.1 针形微电极制备第35页
        2.10.2 微电极表面抗污染膜涂布第35页
        2.10.3 平板膜扩散系数测定第35-36页
        2.10.4 微电极检测中空纤维膜扩散系数第36-37页
        2.10.5 微型化透析装置测定中空纤维膜扩散系数第37页
        2.10.6 微电极测定胶原-细胞混合物的扩散系数第37-38页
    2.11 统计学处理第38-39页
第三章 微型化生物人工肝的低温保存第39-55页
    3.1 肝细胞培养条件优化第39-41页
    3.2 低温保存保护剂筛选第41-44页
    3.3 保护剂合用及其使用方法的优化第44-45页
    3.4 双鼠李糖脂的作用第45-48页
    3.5 低温保存后肝细胞功能的综合评价第48-50页
    3.6 低温保存保护剂用于肝细胞的超低温保存第50-54页
        3.6.1 肝细胞的超低温保存第50-51页
        3.6.2 单层贴壁培养细胞活性评价第51-52页
        3.6.3 组织化培养细胞活性评价第52-54页
    3.7 本章小结第54-55页
第四章 低温损伤与保护剂作用机理第55-67页
    4.1 有效保护剂反映低温损伤机理第55-57页
    4.2 苦参碱作用机理第57-61页
        4.2.1 苦参碱在复温阶段的保护作用第57-59页
        4.2.2 苦参碱在低温阶段的毒性作用第59-60页
        4.2.3 苦参碱对胞内游离钙离子的调节作用第60-61页
    4.3 双鼠李糖脂作用机理第61-63页
        4.3.1 双鼠李糖脂单独作用第61-62页
        4.3.2 双鼠李糖脂与海藻糖协同作用第62-63页
    4.4 保护剂合用对细胞基因表达的影响第63-65页
    4.5 保护剂合用对细胞骨架微丝的影响第65-66页
    4.6 本章小结第66-67页
第五章 基于微电极的中空纤维膜传质检测方法建立第67-77页
    5.1 微电极检测物质浓度方法的建立及可行性验证第67-70页
        5.1.1 微电极检测物质浓度方法的建立第67-69页
        5.1.2 微电极检测物质浓度随时间变化的可行性验证第69-70页
    5.2 中空纤维膜扩散系数检测方法的建立第70-72页
    5.3 微电极检测中空纤维膜扩散系数的可靠性验证第72-76页
        5.3.1 微型透析器法验证第72-74页
        5.3.2 不同类型中空纤维膜定性验证第74-76页
    5.4 本章小结第76-77页
第六章 微型化生物人工肝低温保存保护剂传质研究第77-88页
    6.1 微电极表面抗生物污染修饰第77-79页
        6.1.1 抗污染薄膜制备及其性能评价第77-78页
        6.1.2 微电极涂布抗污染膜层及其性能评价第78-79页
    6.2 中空纤维膜及胶原-细胞混合体系中的各种保护剂扩散系数测定第79-84页
    6.3 低温保存保护剂在反应器中的传质达稳定所需时间第84-87页
    6.4 本章小结第87-88页
第七章 结论与展望第88-92页
    7.1 总结第88-90页
    7.2 不足之处第90页
    7.3 展望第90-92页
论文主要创新点第92-93页
参考文献第93-100页
作者简历第100页
攻读学位期间发表的论文第100页
发明专利第100页

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