| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-28页 |
| 1.1 生物人工肝概述 | 第16-17页 |
| 1.2 肝细胞的低温保存和超低温保存 | 第17-24页 |
| 1.2.1 低温保存及其保护剂 | 第18-21页 |
| 1.2.2 低温损伤机理 | 第21-23页 |
| 1.2.3 超低温保存 | 第23-24页 |
| 1.3 中空纤维型生物人工肝的传质研究 | 第24-27页 |
| 1.3.1 反应器传质特点及其研究现状 | 第24-25页 |
| 1.3.2 中空纤维膜扩散系数的获得方法 | 第25-26页 |
| 1.3.3 微电极技术及其在传质检测中的应用 | 第26-27页 |
| 1.4 研究思路 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-39页 |
| 2.1 动物 | 第28页 |
| 2.2 试剂与器材 | 第28-29页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第28页 |
| 2.2.2 主要器材 | 第28-29页 |
| 2.3 培养基与所用溶液配方 | 第29-30页 |
| 2.3.1 大鼠肝细胞培养基 | 第29页 |
| 2.3.2 低温保存培养基 | 第29-30页 |
| 2.3.3 4×浓缩培养基 | 第30页 |
| 2.3.4 磷酸缓冲液(PBS) | 第30页 |
| 2.3.5 细胞洗涤培养基 | 第30页 |
| 2.4 大鼠肝细胞收获方法 | 第30页 |
| 2.5 细胞培养方法 | 第30-31页 |
| 2.5.1 单层贴壁培养 | 第30-31页 |
| 2.5.2 中空纤维凝胶包埋培养 | 第31页 |
| 2.5.3 中空纤维柱状聚集体培养 | 第31页 |
| 2.6 低温保存方法 | 第31页 |
| 2.7 超低温保存方法 | 第31-32页 |
| 2.8 细胞相关功能分析 | 第32-34页 |
| 2.8.1 细胞活率检测 | 第32页 |
| 2.8.2 尿素含量分析 | 第32页 |
| 2.8.3 白蛋白分析 | 第32页 |
| 2.8.4 线粒体膜电位检测 | 第32-33页 |
| 2.8.5 活性氧自由基检测 | 第33页 |
| 2.8.6 胞内谷胱甘肽测定 | 第33页 |
| 2.8.7 胞质内游离钙离子浓度(Ca~(2+))测定 | 第33页 |
| 2.8.8 细胞CYP 450活性测定 | 第33-34页 |
| 2.8.9 胞内海藻糖浓度测定 | 第34页 |
| 2.8.10 PCR基因检测 | 第34页 |
| 2.8.11 胶原凝胶收缩率测定 | 第34页 |
| 2.9 中空纤维膜形貌及渗透特性表征 | 第34-35页 |
| 2.9.1 扫描电极观察中空纤维膜形貌 | 第34页 |
| 2.9.2 中空纤维膜渗透特性表征 | 第34-35页 |
| 2.10 传质相关测定及分析方法 | 第35-38页 |
| 2.10.1 针形微电极制备 | 第35页 |
| 2.10.2 微电极表面抗污染膜涂布 | 第35页 |
| 2.10.3 平板膜扩散系数测定 | 第35-36页 |
| 2.10.4 微电极检测中空纤维膜扩散系数 | 第36-37页 |
| 2.10.5 微型化透析装置测定中空纤维膜扩散系数 | 第37页 |
| 2.10.6 微电极测定胶原-细胞混合物的扩散系数 | 第37-38页 |
| 2.11 统计学处理 | 第38-39页 |
| 第三章 微型化生物人工肝的低温保存 | 第39-55页 |
| 3.1 肝细胞培养条件优化 | 第39-41页 |
| 3.2 低温保存保护剂筛选 | 第41-44页 |
| 3.3 保护剂合用及其使用方法的优化 | 第44-45页 |
| 3.4 双鼠李糖脂的作用 | 第45-48页 |
| 3.5 低温保存后肝细胞功能的综合评价 | 第48-50页 |
| 3.6 低温保存保护剂用于肝细胞的超低温保存 | 第50-54页 |
| 3.6.1 肝细胞的超低温保存 | 第50-51页 |
| 3.6.2 单层贴壁培养细胞活性评价 | 第51-52页 |
| 3.6.3 组织化培养细胞活性评价 | 第52-54页 |
| 3.7 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 低温损伤与保护剂作用机理 | 第55-67页 |
| 4.1 有效保护剂反映低温损伤机理 | 第55-57页 |
| 4.2 苦参碱作用机理 | 第57-61页 |
| 4.2.1 苦参碱在复温阶段的保护作用 | 第57-59页 |
| 4.2.2 苦参碱在低温阶段的毒性作用 | 第59-60页 |
| 4.2.3 苦参碱对胞内游离钙离子的调节作用 | 第60-61页 |
| 4.3 双鼠李糖脂作用机理 | 第61-63页 |
| 4.3.1 双鼠李糖脂单独作用 | 第61-62页 |
| 4.3.2 双鼠李糖脂与海藻糖协同作用 | 第62-63页 |
| 4.4 保护剂合用对细胞基因表达的影响 | 第63-65页 |
| 4.5 保护剂合用对细胞骨架微丝的影响 | 第65-66页 |
| 4.6 本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 基于微电极的中空纤维膜传质检测方法建立 | 第67-77页 |
| 5.1 微电极检测物质浓度方法的建立及可行性验证 | 第67-70页 |
| 5.1.1 微电极检测物质浓度方法的建立 | 第67-69页 |
| 5.1.2 微电极检测物质浓度随时间变化的可行性验证 | 第69-70页 |
| 5.2 中空纤维膜扩散系数检测方法的建立 | 第70-72页 |
| 5.3 微电极检测中空纤维膜扩散系数的可靠性验证 | 第72-76页 |
| 5.3.1 微型透析器法验证 | 第72-74页 |
| 5.3.2 不同类型中空纤维膜定性验证 | 第74-76页 |
| 5.4 本章小结 | 第76-77页 |
| 第六章 微型化生物人工肝低温保存保护剂传质研究 | 第77-88页 |
| 6.1 微电极表面抗生物污染修饰 | 第77-79页 |
| 6.1.1 抗污染薄膜制备及其性能评价 | 第77-78页 |
| 6.1.2 微电极涂布抗污染膜层及其性能评价 | 第78-79页 |
| 6.2 中空纤维膜及胶原-细胞混合体系中的各种保护剂扩散系数测定 | 第79-84页 |
| 6.3 低温保存保护剂在反应器中的传质达稳定所需时间 | 第84-87页 |
| 6.4 本章小结 | 第87-88页 |
| 第七章 结论与展望 | 第88-92页 |
| 7.1 总结 | 第88-90页 |
| 7.2 不足之处 | 第90页 |
| 7.3 展望 | 第90-92页 |
| 论文主要创新点 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-100页 |
| 作者简历 | 第100页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第100页 |
| 发明专利 | 第100页 |
