| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 细胞色素P450 | 第12-16页 |
| 1.1.1 细胞色素P450概况 | 第12-13页 |
| 1.1.2 细胞色素P450分布 | 第13页 |
| 1.1.3 细胞色素P450分类 | 第13-15页 |
| 1.1.4 真菌细胞色素P450的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 CYP51研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 CYP51的概述 | 第16-18页 |
| 1.2.2 CYP51的一级结构序列特征 | 第18页 |
| 1.2.3 CYP51的晶体结构解析 | 第18-20页 |
| 1.3 真核P450的异源表达 | 第20-22页 |
| 1.3.1 真核P450异源表达的系统 | 第20-22页 |
| 1.3.2 真核P450原核表达的策略 | 第22页 |
| 1.4 本文的研究内容,目的与意义 | 第22-24页 |
| 2 实验材料与方法 | 第24-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 化学试剂和抗菌素 | 第24页 |
| 2.1.3 实验所用的工具酶,试剂盒及其他试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要缓冲液及其配方 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 稻瘟菌基因组DNA提取 | 第26页 |
| 2.2.2 稻瘟菌RNA的提取和cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.3 稻瘟菌CYP51基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.4 DNA限制性内切酶酶切反应 | 第28页 |
| 2.2.5 DNA片段的回收和连接 | 第28页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备(TSB法) | 第28-29页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第29页 |
| 2.2.8 质粒DNA的小量提取 | 第29页 |
| 2.2.9 阳性克隆的筛选(α互补法) | 第29-30页 |
| 2.2.10 重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.11 重组蛋白的原核表达 | 第30页 |
| 2.2.12 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第30-31页 |
| 2.2.13 目的蛋白的制备和蛋白含量测定 | 第31页 |
| 2.2.14 稻瘟菌CYP51的生物信息学分析预测 | 第31-32页 |
| 3 实验结果与分析 | 第32-57页 |
| 3.1 稻瘟菌CYP51A和CYP51B的克隆表达 | 第32-43页 |
| 3.1.1 稻瘟菌CYP51基因克隆与序列分析 | 第32-38页 |
| 3.1.2 重组表达质粒pET28-Mg/pET32-Mg的构建及表达 | 第38-42页 |
| 3.1.3 稻瘟菌CYP51的稀有密码子分析及不同宿主菌的诱导表达 | 第42-43页 |
| 3.2 稻瘟菌CYP51的生物信息学分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 稻瘟菌CYP51A和CYP51B的跨膜结构分析 | 第43-46页 |
| 3.2.2 稻瘟菌CYP51的全长及突变体同源模建构建 | 第46-47页 |
| 3.3 稻瘟菌CYP51A突变体构建及表达条件优化 | 第47-53页 |
| 3.3.1 稻瘟菌CYP51A突变体重组质粒的构建和表达 | 第47-49页 |
| 3.3.2 稻瘟菌CYP51A突变体的表达条件优化 | 第49-53页 |
| 3.4 稻瘟菌CYP51B基因的表达和MRNA二级结构分析 | 第53-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
