| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 新型环形病毒AGV2研究进展 | 第11-16页 |
| 1 新型环形病毒AGV2流行病学 | 第11-12页 |
| 2 新型环形病毒AGV2基因组及编码蛋白 | 第12-13页 |
| 3 环形病毒VP3蛋白凋亡功能 | 第13-15页 |
| 3.1 细胞凋亡简介 | 第13-14页 |
| 3.2 CAV VP3蛋白凋亡功能 | 第14-15页 |
| 3.3 AGV2 VP3蛋白凋亡功能 | 第15页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| 研究一 AGV2 VP3蛋白不同潜在磷酸化位点变体构建 | 第16-30页 |
| 1 材料 | 第16-17页 |
| 1.1 生物材料 | 第16页 |
| 1.2 主要仪器 | 第16页 |
| 1.3 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2 方法 | 第17-24页 |
| 2.1 引物设计 | 第17-18页 |
| 2.2 VP3变体重组载体的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.1 重组载体构建原理及示意图 | 第18页 |
| 2.2.2 OVERLAP PCR扩增原理 | 第18-19页 |
| 2.3 PCR体系及扩增 | 第19-20页 |
| 2.4 VP3变体重组质粒的构建 | 第20-22页 |
| 2.4.1 重组反应 | 第20-21页 |
| 2.4.2 质粒验证 | 第21-22页 |
| 2.5 细胞转染 | 第22页 |
| 2.6 Western blot分析 | 第22-24页 |
| 2.6.1 细胞裂解 | 第22-23页 |
| 2.6.2 电泳、转印及免疫反应 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-28页 |
| 3.1 目的基因的扩增 | 第24-26页 |
| 3.2 菌落PCR验证 | 第26-27页 |
| 3.3 序列比对 | 第27-28页 |
| 3.4 Western blot分析AGV2 VP3蛋白的真核表达 | 第28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 研究二 不同潜在磷酸化位点对AGV2 VP3凋亡功能影响 | 第30-41页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 生物材料 | 第30页 |
| 1.2 主要仪器 | 第30-31页 |
| 1.3 试剂 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-34页 |
| 2.1 细胞培养 | 第31页 |
| 2.1.1 HCT116细胞培养 | 第31页 |
| 2.1.2 DF1细胞培养 | 第31页 |
| 2.1.3 CEF细胞培养 | 第31页 |
| 2.2 细胞转染 | 第31-32页 |
| 2.3 共聚焦荧光显微镜分析EGFP-VP3的表达 | 第32页 |
| 2.4 Caspase 3试剂盒检测细胞凋亡 | 第32-33页 |
| 2.5 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-39页 |
| 3.1 激光共聚焦观察 | 第34-36页 |
| 3.2 VP3变体在CEF和DF1中的荧光定位 | 第36-37页 |
| 3.3 Caspase 3活性检测试验 | 第37-38页 |
| 3.4 流式细胞术检测凋亡功能 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 全文总结 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
