| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 聚-γ-谷氨酸 | 第9-11页 |
| 1.1.1 聚-γ-谷氨酸的结构与性质 | 第9页 |
| 1.1.2 聚-γ-谷氨酸的应用 | 第9-11页 |
| 1.1.3 聚-γ-谷氨酸的相关合成基因 | 第11页 |
| 1.2 聚-γ-谷氨酸代谢关键酶 | 第11-13页 |
| 1.2.1 谷氨酸消旋酶 | 第11-12页 |
| 1.2.2 D-丙氨酸转氨酶 | 第12页 |
| 1.2.3 谷氨酰胺合成酶 | 第12-13页 |
| 1.3 Mn~(2+)浓度对聚-γ-谷氨酸的构型比的进展和国内外研究现状 | 第13-15页 |
| 1.3.1 地衣芽孢杆菌 | 第13-14页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌 | 第14-15页 |
| 1.3.3 炭疽菌 | 第15页 |
| 1.4 地衣芽孢杆菌中的聚-γ-谷氨酸生物合成 | 第15-17页 |
| 1.4.1 地衣芽孢杆菌简介 | 第15页 |
| 1.4.2 地衣芽孢杆菌中聚-γ-谷氨酸的合成途径 | 第15-16页 |
| 1.4.3 地衣芽孢杆菌体内转录水平 | 第16-17页 |
| 1.5 本课题的研究意义及内容 | 第17-19页 |
| 第2章 本课题材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 相关实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 实验菌株与载体构建 | 第19-21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 实验仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基 | 第22页 |
| 2.1.5 菌株培养条件 | 第22-23页 |
| 2.2 本课题实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.1 两菌株生长曲线的测定 | 第23页 |
| 2.2.2 大肠杆菌表达载体的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.2.1 引物设计 | 第23页 |
| 2.2.2.2 PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.2.3 大肠杆菌表达载体的构建 | 第24页 |
| 2.2.2.4 连接及转化 | 第24-25页 |
| 2.2.2.5 质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 大肠杆菌重组蛋白的表达与纯化 | 第26-28页 |
| 2.2.3.1 蛋白诱导表达 | 第26页 |
| 2.2.3.2 重组蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.3.3 蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| 2.2.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-Page检测 | 第27-28页 |
| 2.2.4 重组蛋白的体外酶活检测 | 第28-29页 |
| 2.2.4.1 谷氨酸消旋酶酶活测定 | 第28页 |
| 2.2.4.2 D-丙氨酸转氨酶酶活测定 | 第28页 |
| 2.2.4.3 谷氨酰胺合成酶酶活测定 | 第28-29页 |
| 2.2.4.4 谷氨酸消旋酶动力学参数测定 | 第29页 |
| 2.2.4.5 D-丙氨酸转氨酶动力学参数测定 | 第29页 |
| 2.2.4.6 谷氨酰胺合成酶动力学参数测定 | 第29页 |
| 2.2.5 谷氨酰胺合成酶的体内酶活检测 | 第29页 |
| 2.2.6 地衣芽孢杆菌实时荧光定量PCR分析 | 第29-31页 |
| 2.2.6.1 设计引物 | 第29页 |
| 2.2.6.2 RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.6.3 反转录合成第一链cDNA | 第30-31页 |
| 2.2.6.4 RT-PCR | 第31页 |
| 2.2.7 聚-γ-谷氨酸构型分析方法 | 第31-33页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第33-47页 |
| 3.1 两株菌生长曲线的测定 | 第33页 |
| 3.2 不同Mn~(2+)浓度下PGA构型变化 | 第33-34页 |
| 3.3 谷氨酸消旋酶，D-丙氨酸转氨酶与谷氨酰胺合成酶在大肠杆菌中诱导表达 | 第34-37页 |
| 3.3.1 两菌株基因组的提取 | 第34-35页 |
| 3.3.2 目的基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 3.3.3 表达载体构建验证 | 第36-37页 |
| 3.4 重组蛋白纯化 | 第37-38页 |
| 3.5 谷氨酸消旋酶的酶学性质 | 第38-40页 |
| 3.5.1 蛋白浓度 | 第38页 |
| 3.5.2 反应时间的确定 | 第38-39页 |
| 3.5.3 谷氨酸消旋酶动力学参数的分析 | 第39-40页 |
| 3.6 D-丙氨酸转氨酶的酶学性质 | 第40-42页 |
| 3.6.1 蛋白浓度 | 第40页 |
| 3.6.2 反应时间的确定 | 第40-41页 |
| 3.6.3 D-丙氨酸转氨酶动力学参数的分析 | 第41-42页 |
| 3.7 谷氨酰胺合成酶的酶学性质 | 第42-43页 |
| 3.7.1 蛋白浓度 | 第42页 |
| 3.7.2 反应时间的确定 | 第42页 |
| 3.7.3 谷氨酰胺合成酶动力学参数的分析 | 第42-43页 |
| 3.8 谷氨酰胺合成酶体内酶活检测 | 第43-44页 |
| 3.9 γ-D-PGA合成相关基因体内转录水平的变化 | 第44-47页 |
| 3.9.1 RNA提取结果 | 第44-45页 |
| 3.9.2 反转cDNA | 第45-46页 |
| 3.9.3 不同关键酶转录水平的变化结果 | 第46-47页 |
| 第4章 结论 | 第47-49页 |
| 第5章 展望 | 第49-50页 |
| 附录 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
