| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-45页 |
| 第一章 蜜蜂蜂毒的研究与开发利用进展 | 第15-29页 |
| 1．1 蜂毒的来源 | 第15-16页 |
| 1．2 蜂毒的理化特性和成分 | 第16-21页 |
| 1．3 蜂毒的应用 | 第21-24页 |
| 1．4 蜂毒的分子生物学研究 | 第24-27页 |
| 1．5 展望 | 第27-29页 |
| 第二章 蜜蜂蜂毒磷脂酶A_2研究进展 | 第29-36页 |
| 2．1 BvPLA_2的特性 | 第29-31页 |
| 2．2 粗蜂毒中BVPLA_2的活性测定和分离纯化 | 第31-32页 |
| 2．3 BvPLA_2基因的克隆与表达 | 第32-33页 |
| 2．4 BVPLA_2的分子结构与进化 | 第33-35页 |
| 2．5 BVPLA_2的应用及展望 | 第35-36页 |
| 第三章 蜜蜂蜂毒透明质酸酶研究进展 | 第36-45页 |
| 3．1 BvHya的特性 | 第36-37页 |
| 3．2 粗蜂毒中BVHya的分离纯化 | 第37-39页 |
| 3．3 BvHya基因的克隆与表达 | 第39-41页 |
| 3．4 BvHya的分子结构与进化 | 第41-43页 |
| 3．5 Hya与BVllya的应用及展望 | 第43-45页 |
| 第二部分 一般材料与方法 | 第45-55页 |
| 第三部分 中华蜜蜂和意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A_2基因的克隆与表达 | 第55-79页 |
| 第四章 中华蜜蜂和意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A_2基因的克隆与序列分析 | 第56-63页 |
| 4．1 材料和方法 | 第56-58页 |
| 4．2 结果与分析 | 第58-61页 |
| 4．2.1 RT-PCR扩增目的基因 | 第58-59页 |
| 4．2.2 重组质粒pGEM-AcPLA_2和pGEM-AmPLA_2的鉴定 | 第59页 |
| 4．2.3 序列分析 | 第59-61页 |
| 4．3 讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 中蜂和意蜂蜂毒磷脂酶A_2基因在昆虫细胞中的表达 | 第63-73页 |
| 5．1 材料和方法 | 第63-66页 |
| 5．2 结果与分析 | 第66-70页 |
| 5．2.1 重组杆状病毒供体质粒的构建 | 第66页 |
| 5．2.2 重组病毒的获得 | 第66页 |
| 5．2.3 Lipofectin共转染 | 第66页 |
| 5．2.4 细胞中重组病毒粒子的PCR检测 | 第66-68页 |
| 5．2.5 SDS-PAGE分析 | 第68页 |
| 5．2.6 多克隆抗体的效价测定 | 第68页 |
| 5．2.7 Western-blot | 第68-69页 |
| 5．2.8 PLA_2酶活性的测定 | 第69-70页 |
| 5．3 讨论 | 第70-73页 |
| 第六章 中蜂和意蜂蜂毒磷脂酶A_2基因在大肠杆菌中的表达 | 第73-79页 |
| 6．1 材料和方法 | 第73-75页 |
| 6．2 结果与分析 | 第75-76页 |
| 6．2.1 表达载体pET-AcPLA_2和pET-AmPLA_2的构建 | 第75-76页 |
| 6．2.2 目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第76页 |
| 6．3 讨论 | 第76-79页 |
| 第四部分 中华蜜蜂和意大利蜜蜂蜂毒透明质酸酶基因的克隆与表达 | 第79-101页 |
| 第七章 中华蜜蜂和意大利蜜蜂蜂毒透明质酸酶基因的克隆与序列分析 | 第80-89页 |
| 7．1 材料和方法 | 第80-82页 |
| 7．2 结果与分析 | 第82-87页 |
| 7．2.1 RT-PCR扩增目的基因 | 第82页 |
| 7．2.2 重组质粒pGEM-AcHya和pGEM-AmHya的鉴定 | 第82-83页 |
| 7．2.3 核苷酸序列特征 | 第83-85页 |
| 7．2.4 同源性分析 | 第85页 |
| 7．2.5 Hya基因的分子进化 | 第85-87页 |
| 7．3 讨论 | 第87-89页 |
| 第八章 中蜂和意蜂蜂毒透明质酸酶基因在昆虫细胞中的表达 | 第89-96页 |
| 8．1 材料和方法 | 第89-91页 |
| 8．2 结果与分析 | 第91-94页 |
| 8．2.1 重组杆状病毒供体质粒的构建 | 第91-92页 |
| 8．2.2 重组病毒的获得 | 第92页 |
| 8．2.3 Lipofectin共转染 | 第92页 |
| 8．2.4 细胞中重组病毒粒子的PCR检测 | 第92-93页 |
| 8．2.5 SDS-PAGE分析 | 第93-94页 |
| 8．3 讨论 | 第94-96页 |
| 第九章 中蜂和意蜂蜂毒透明质酸酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第96-101页 |
| 9．1 材料和方法 | 第96-98页 |
| 9．2 结果与分析 | 第98-99页 |
| 9．2.1 重组表达载体的构建 | 第98页 |
| 9．2.2 目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第98-99页 |
| 9．3 讨论 | 第99-101页 |
| 主要结论 | 第101-104页 |
| 英文摘要 | 第104页 |
| 参考文献 | 第108-116页 |
| 附录一 在GenBank登录的中华蜜蜂蜂毒基因序列 | 第116-120页 |
| 1． Apis cerana cerana phospholipase A-2 precursor（PLA2）mRNA,partialcds．ACCESSION AF321087 | 第117-118页 |
| 2． DEFINITION Apis cerana cerana hyaluronidase mRNA,complete cds．ACCESSION AF351623 | 第118-120页 |
| 附录二 国家知识产权局专利受理通知 | 第120-121页 |
| 附录三 博士生期间发表的论文 | 第121页 |
