| 第一章 绪论 | 第12-41页 |
| 1.1 概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 肝癌早期诊断的可能性 | 第12-13页 |
| 1.1.2 AFP的常用检测方法及诊断价值 | 第13页 |
| 1.1.3 常用AFP检测方法应用于诊断的限制与进展 | 第13-14页 |
| 1.1.4 其他肝癌标志物 | 第14-16页 |
| 1.1.4.1 AFP异质体 | 第14-15页 |
| 1.1.4.2 异常凝血酶原 | 第15页 |
| 1.1.4.3 端粒酶 | 第15页 |
| 1.1.4.4 AFPmRNA | 第15-16页 |
| 1.2 联合检测的肝肿瘤标志物 | 第16-29页 |
| 1.2.1 肝肿瘤标志物AFP与生物发光免疫技术 | 第16-18页 |
| 1.2.1.1 AFP的代谢 | 第17页 |
| 1.2.1.2 生物发光的研究 | 第17-18页 |
| 1.2.1.3 AFP与生物发光免疫技术 | 第18页 |
| 1.2.2 肝肿瘤标志物IGF-Ⅱ基因P3启动子DNA多态性 | 第18-21页 |
| 1.2.2.1 IGF-Ⅱ的分子结构 | 第19页 |
| 1.2.2.2 IGF-Ⅱ临床意义 | 第19-20页 |
| 1.2.2.3 DNA多态性与肝癌早期诊断 | 第20-21页 |
| 1.2.3 肝肿瘤标志物P16基因与DNA甲基化 | 第21-29页 |
| 1.2.3.1 P16基因的结构 | 第22页 |
| 1.2.3.2 P16基因的功能 | 第22-23页 |
| 1.2.3.3 P16基因在肝癌中的变异 | 第23-25页 |
| 1.2.3.4 P16基因甲基化与肝癌 | 第25-29页 |
| 1.2.3.5 血浆P16基因甲基化与肝癌早期诊断 | 第29页 |
| 1.3 肝肿瘤标志物与肝癌早期诊断研究近况 | 第29-34页 |
| 1.3.1 肝肿瘤标志物研究近况 | 第29-33页 |
| 1.3.1.1 AFP研究近况 | 第29-31页 |
| 1.3.1.2 IGF-Ⅱ研究近况 | 第31-32页 |
| 1.3.1.3 P16基因研究近况 | 第32-33页 |
| 1.3.1.4 其他肝肿瘤标志物研究近况 | 第33页 |
| 1.3.2 肝肿瘤标志物联合检测与肝癌早期诊断近况研究 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-41页 |
| 第二章 实验仪器与试剂 | 第41-46页 |
| 2.1 实验仪器 | 第41-42页 |
| 2.2 试剂与溶液的配制 | 第42-46页 |
| 第三章 肝癌早期诊断特异AFP的生物发光免疫分析技术的研究 | 第46-70页 |
| 3.1 前言 | 第46-48页 |
| 3.2 实验材料与实验方法 | 第48-53页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.2.1.1 菌种 | 第48页 |
| 3.2.1.2 血清样品 | 第48页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第48-53页 |
| 3.2.2.1 明亮发光杆菌502的培养 | 第48-49页 |
| 3.2.2.2 荧光素酶的提取 | 第49-51页 |
| 3.2.2.3 荧光素酶的纯度检测 | 第51页 |
| 3.2.2.4 荧光素酶的亚基拆分和重聚与生物发光活性的测定 | 第51页 |
| 3.2.2.5 荧光素酶的分子量测定 | 第51页 |
| 3.2.2.6 荧光素酶的固相化 | 第51-52页 |
| 3.2.2.7 荧光素酶发光活性的测定 | 第52页 |
| 3.2.2.8 G6PDH标记羊抗鼠抗体 | 第52-53页 |
| 3.2.2.9 G6PDH标记抗AFP抗体的活性测定 | 第53页 |
| 3.2.2.10 生物发光免疫分析测定样品中AFP含量 | 第53页 |
| 3.3 结果 | 第53-61页 |
| 3.3.1 明亮发光杆菌502的培养 | 第53-54页 |
| 3.3.2 荧光素酶的提取、纯化和发光活性的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.2.1 荧光素酶的提取、纯化 | 第54页 |
| 3.3.2.2 荧光素酶发光活性的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.3 荧光素酶的分子量测定 | 第55页 |
| 3.3.4 影响荧光素酶固相化的因素 | 第55-57页 |
| 3.3.4.1 溴化氰对荧光素酶固相化的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.4.2 时间和温度对荧光素酶固相化的影响 | 第56页 |
| 3.3.4.3 NADH对荧光素酶固相化的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.4.4 BSA对荧光素酶固相化的影响 | 第57页 |
| 3.3.5 黄素还原酶对荧光素酶发光活性的作用 | 第57-58页 |
| 3.3.6 G6PDH标记抗人AFP抗体的生物发光免疫活性的测定 | 第58-59页 |
| 3.3.6.1 MBS在G6PDH标记抗AFP抗体中的作用 | 第58-59页 |
| 3.3.6.2 G6PDH标记抗AFP抗体活性的测定 | 第59页 |
| 3.3.7 AFP标准品生物发光免疫活性测定与标准曲线 | 第59-60页 |
| 3.3.8 生物发光免疫技术检测结果 | 第60-61页 |
| 3.3.8.1 检测患者血清样品AFP含量 | 第60-61页 |
| 3.3.8.2 生物发光免疫技术测定AFP的检出率 | 第61页 |
| 3.3.8.3 生物发光免疫技术检测AFP正常值的确定 | 第61页 |
| 3.4 讨论 | 第61-66页 |
| 3.4.1 荧光素酶的纯化与发光活性 | 第62页 |
| 3.4.2 荧光素酶生物发光活性条件的选择 | 第62-64页 |
| 3.4.3 MBS和G6PDH标记反应体系与生物发光反应关系 | 第64页 |
| 3.4.4 生物发光与酶标免疫反应的关系 | 第64页 |
| 3.4.5 生物发光免疫技术检测AFP的肝癌早期诊断临床意义 | 第64-65页 |
| 3.4.6 应用与展望 | 第65-66页 |
| 3.5 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 第四章 IGF-Ⅱ基因P3启动子多态性与肝癌早期诊断 | 第70-97页 |
| 4.1 前言 | 第70-72页 |
| 4.2 实验材料与实验方法 | 第72-80页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 4.2.1.1 引物 | 第72-500072页 |
| 4.2.1.2 DNA Marker(2000+1 | 第500072-72页 |
| 4.2.1.3 样品 | 第72-73页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第73-80页 |
| 4.2.2.1 全基因组的提取 | 第73页 |
| 4.2.2.2 全基因组琼脂糖电泳 | 第73-74页 |
| 4.2.2.3 全基因组提取液DNA的定量 | 第74页 |
| 4.2.2.4 聚合酶链反应(PCR) | 第74-75页 |
| 4.2.2.5 PCR产物的分离 | 第75-76页 |
| 4.2.2.6 PCR产物纯化和回收 | 第76-77页 |
| 4.2.2.7 PCR产物DNA溶液的定量 | 第77页 |
| 4.2.2.8 大量PCR产物目的片段的制备 | 第77页 |
| 4.2.2.9 限制性内切酶反应 | 第77-80页 |
| 4.2.2.10 PCR产物检测分析方法 | 第80页 |
| 4.3 结果 | 第80-89页 |
| 4.3.1 全基因组提取液DNA的定量 | 第80页 |
| 4.3.2 PCR产物DNA的定量 | 第80页 |
| 4.3.3 各样品组肝组织PCR结果 | 第80-81页 |
| 4.3.4 限制性内切酶酶切结果 | 第81-87页 |
| 4.3.4.1 BstE-Ⅱ酶切结果 | 第81-83页 |
| 4.3.4.2 Ava -Ⅱ酶切结果 | 第83-84页 |
| 4.3.4.3 BgI-Ⅱ酶切结果 | 第84-85页 |
| 4.3.4.4 Sac -Ⅱ酶切结果 | 第85-86页 |
| 4.3.4.5 EcoR-Ⅰ酶切结果 | 第86-87页 |
| 4.3.5 BstE-Ⅱ酶切IGF-Ⅱ基因P3启动子区域DNA多态性与肝癌 | 第87-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-94页 |
| 4.4.1 PCR-RFLP方法与肝肿瘤标志物基因多态性分析 | 第89-90页 |
| 4.4.2 限制性内切酶酶切产物的分析 | 第90-93页 |
| 4.4.2.1 BstE-Ⅱ酶切产物与肝癌早期诊断的分析 | 第90-91页 |
| 4.4.2.2 Ava-Ⅱ酶切产物与肝癌再器诊断的分析 | 第91-92页 |
| 4.4.2.3 BgI-Ⅱ酶切产物与肝癌早期诊断的分析 | 第92页 |
| 4.4.2.4 EcoR-Ⅰ酶切产物与肝癌早期诊断的分析 | 第92页 |
| 4.4.2.5 SacⅡ酶切产物与肝癌早期诊断的分析 | 第92-93页 |
| 4.4.3 IGF-Ⅱ基因P3启动子区域DNA多态性与肝癌早期诊断 | 第93页 |
| 4.4.4 应用与展望 | 第93-94页 |
| 4.5 小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-97页 |
| 第五章 P16基因甲基化与肝癌早期诊断的研究 | 第97-115页 |
| 5.1 前言 | 第97-98页 |
| 5.2 实验材料与实验方法 | 第98-103页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第98页 |
| 5.2.1.1 样品来源 | 第98页 |
| 5.2.1.2 血浆、血清的收集 | 第98页 |
| 5.2.1.3 λ Hind Ⅲdigest DNA Marker 的构成 | 第98页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第98-103页 |
| 5.2.2.1 血浆DNA的提取 | 第98-99页 |
| 5.2.2.2 血浆DNA的分子量测定 | 第99页 |
| 5.2.2.3 甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP) | 第99-103页 |
| 5.2.2.4 血清AFP的测定 | 第103页 |
| 5.3 结果 | 第103-108页 |
| 5.3.1 血浆DNA的纯度与分子量测定 | 第103页 |
| 5.3.2 血浆P16基因甲基化的检测 | 第103-105页 |
| 5.3.3 血清AFP水平与血浆P16基因甲基化比较 | 第105-107页 |
| 5.3.3.1 血清AFP水平 | 第105-107页 |
| 5.3.3.2 AFP与P16基因甲基化的肝癌检出率的比较 | 第107页 |
| 5.3.4 DNA修饰结果 | 第107-108页 |
| 5.4 讨论 | 第108-111页 |
| 5.4.1 血浆DNA纯度与分子量 | 第108页 |
| 5.4.2 血浆P16基因甲基化与肝癌早期诊断 | 第108-109页 |
| 5.4.3 AFP和P16基因甲基化二者互补性与肝癌早期诊断 | 第109-110页 |
| 5.4.4 MSP特异性甲基化修饰方法的可靠性 | 第110页 |
| 5.4.5 应用与展望 | 第110-111页 |
| 5.5 小结 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-115页 |
| 第六章 肝肿瘤标准物联合检测与肝癌早期诊断的研究 | 第115-124页 |
| 6.1 前言 | 第115-116页 |
| 6.2 实验材料与方法 | 第116-117页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第116-117页 |
| 6.2.1.1 样品的来源 | 第116页 |
| 6.2.1.2 样品采集贮存 | 第116-117页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第117页 |
| 6.2.2.1 肝肿瘤标志物的提取、制备、测定方法 | 第117页 |
| 6.2.2.2 放射免疫测定法检测血清AFP | 第117页 |
| 6.2.2.3 检测结果阳性标准 | 第117页 |
| 6.3 结果 | 第117-119页 |
| 6.3.1 单项肝肿瘤标志物测定结果 | 第117-118页 |
| 6.3.2 肝肿瘤标志物联合检测结果 | 第118-119页 |
| 6.4 讨论 | 第119-122页 |
| 6.4.1 单项肝肿瘤标志物测定比较与肝癌早期诊断 | 第119-120页 |
| 6.4.2 肝肿瘤标志物联合检测与肝癌早期诊断的临床意义 | 第120-121页 |
| 6.4.3 应用与展望 | 第121-122页 |
| 6.5 小结 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-124页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第124-125页 |
| 论文摘要 | 第125-128页 |
| Abstract | 第128页 |
| 致 谢 | 第132-133页 |
| 吉林大学博士学位论文原创性声明 | 第133页 |
