| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-18页 |
| 1.1 赤潮概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 赤潮的定义及危害 | 第12页 |
| 1.1.2 赤潮的形成因素 | 第12-13页 |
| 1.1.3 中国赤潮概述 | 第13页 |
| 1.2 赤潮藻检测的分子技术 | 第13-14页 |
| 1.3 超分枝滚环扩增检测技术的国内外研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.1 国外研究进展 | 第14页 |
| 1.3.2 国内研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 本课题的主要研究内容 | 第15-16页 |
| 1.5 课题意义 | 第16-18页 |
| 第2章 强壮前沟藻HRCA检测技术的建立 | 第18-44页 |
| 2.1 前言 | 第18-19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 实验藻种及培养条件 | 第19页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.2.3 培养基及溶液配制 | 第19-20页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2.5 基因组DNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.6 DNA浓度测定 | 第21页 |
| 2.2.7 LSU rDNA序列的PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.8 扩增产物的纯化回收 | 第22页 |
| 2.2.9 目的片段的T-A克隆及测序 | 第22页 |
| 2.2.10 序列的比对分析 | 第22-23页 |
| 2.2.11 PLP的设计 | 第23页 |
| 2.2.12 HRCA体系的建立 | 第23-25页 |
| 2.2.13 HRCA体系优化实验 | 第25页 |
| 2.2.14 HRCA体系特异性验证 | 第25页 |
| 2.2.15 HRCA检测灵敏度测试 | 第25页 |
| 2.2.16 模拟自然水样的HRCA检测 | 第25-26页 |
| 2.2.17 自然水样的HRCA检测 | 第26页 |
| 2.3 结果 | 第26-42页 |
| 2.3.1 基因组提取及浓度测定 | 第26-27页 |
| 2.3.2 LSU rDNA序列的扩增 | 第27页 |
| 2.3.3 PCR产物纯化回收 | 第27-28页 |
| 2.3.4 阳性克隆菌株的筛选及测序 | 第28-30页 |
| 2.3.5 PLP设计结果 | 第30-32页 |
| 2.3.6 HRCA体系的建立及酶切验证 | 第32-33页 |
| 2.3.7 HRCA体系优化结果 | 第33-36页 |
| 2.3.8 HRCA体系特异性测试结果 | 第36-38页 |
| 2.3.9 HRCA体系灵敏度测试结果 | 第38-40页 |
| 2.3.10 HRCA体系模拟自然水样检测结果 | 第40-41页 |
| 2.3.11 自然水样的HRCA检测结果 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42页 |
| 2.5 小结 | 第42-44页 |
| 第3章 强壮前沟藻RT-qHRCA和RT-qPCR检测技术的建立 | 第44-59页 |
| 3.1 前言 | 第44页 |
| 3.2 材料与方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 实验藻种及培养 | 第44页 |
| 3.2.2 实验仪器及试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.3 RT-qHRCA PLP和RT-qPCR特异性引物的设计 | 第45页 |
| 3.2.4 RT-qHRCA和RT-qPCR体系的建立 | 第45-46页 |
| 3.2.5 RT-qHRCA PLP和RT-qPCR引物特异性验证 | 第46页 |
| 3.2.6 RT-qHRCA和RT-qPCR标准曲线的生成及灵敏度比较 | 第46-47页 |
| 3.2.7 模拟自然水样的RT-qHRCA和RT-qPCR检测 | 第47页 |
| 3.3 结果 | 第47-57页 |
| 3.3.1 RT-qHRCA PLP和RT-qPCR特异性引物设计结果 | 第47页 |
| 3.3.2 SYBR Green Ⅰ及RT-qPCR引物浓度的优化 | 第47-49页 |
| 3.3.3 RT-qHRCA和RT-qPCR特异性测试结果 | 第49-52页 |
| 3.3.4 RT-qHRCA和RT-qPCR灵敏度检测结果 | 第52-55页 |
| 3.3.5 模拟自然水样检测结果 | 第55-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-58页 |
| 3.5 小结 | 第58-59页 |
| 第4章 赤潮异弯藻HRCA和LAMP检测技术的建立与比较 | 第59-79页 |
| 4.1 前言 | 第59-60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-63页 |
| 4.2.1 实验藻种及培养 | 第60页 |
| 4.2.2 实验试剂及仪器 | 第60页 |
| 4.2.3 LSU rDNA序列克隆及测序 | 第60页 |
| 4.2.4 序列的比对分析 | 第60页 |
| 4.2.5 HRCA PLP及LAMP特异性引物的设计 | 第60-61页 |
| 4.2.6 HRCA及LAMP体系的建立 | 第61页 |
| 4.2.7 HRCA体系的优化实验 | 第61-62页 |
| 4.2.8 HRCA和LAMP体系的特异性验证 | 第62页 |
| 4.2.9 HRCA和LAMP体系灵敏度测试 | 第62页 |
| 4.2.10 模拟自然水样的HRCA及LAMP测试 | 第62-63页 |
| 4.3 结果 | 第63-77页 |
| 4.3.1 基因组DNA的提取及浓度测定 | 第63-64页 |
| 4.3.2 LSU rDNA序列的扩增 | 第64页 |
| 4.3.3 LSU rDNA序列的克隆及测序结果 | 第64-65页 |
| 4.3.4 HRCA PLP及LAMP特异性引物的设计 | 第65-67页 |
| 4.3.5 HRCA体系的建立及酶切验证 | 第67-68页 |
| 4.3.6 HRCA体系的优化 | 第68-71页 |
| 4.3.7 HRCA及LAMP体系的特异性验证结果 | 第71-73页 |
| 4.3.8 HRCA体系及LAMP体系灵敏度检测结果 | 第73页 |
| 4.3.9 模拟自然水样检测 | 第73-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-78页 |
| 4.5 小结 | 第78-79页 |
| 第5章 米氏凯伦藻HRCA和dHRCA检测技术的建立及比较 | 第79-97页 |
| 5.1 前言 | 第79页 |
| 5.2 材料与方法 | 第79-82页 |
| 5.2.1 实验藻种及培养条件 | 第79-80页 |
| 5.2.2 实验试剂及仪器 | 第80页 |
| 5.2.3 LSU rDNA序列克隆及测序 | 第80页 |
| 5.2.4 序列的比对分析 | 第80页 |
| 5.2.5 HRCA及dHRCA PLP的设计 | 第80页 |
| 5.2.6 HRCA及dHRCA体系的建立 | 第80页 |
| 5.2.7 HRCA及dHRCA体系的优化实验 | 第80-81页 |
| 5.2.11 HRCA及dHRCA体系特异性验证 | 第81页 |
| 5.2.12 HRCA和dHRCA体系灵敏度测试 | 第81-82页 |
| 5.2.13 模拟自然水样的HRCA和dHRCA检测 | 第82页 |
| 5.3 结果 | 第82-95页 |
| 5.3.1 基因组提取及浓度测定 | 第82-83页 |
| 5.3.2 LSU rDNA序列的扩增 | 第83页 |
| 5.3.3 LSU rDNA序列的克隆及测序 | 第83-84页 |
| 5.3.4 HRCA及dHRCA PLP的设计 | 第84-86页 |
| 5.3.5 HRCA及dHRCA体系的建立 | 第86-88页 |
| 5.3.6 HRCA和dHRCA体系的优化 | 第88-91页 |
| 5.3.7 HRCA和dHRCA体系特异性验证结果 | 第91页 |
| 5.3.8 HRCA和dHRCA体系灵敏度测试结果 | 第91-94页 |
| 5.3.9 模拟自然水样检测 | 第94-95页 |
| 5.4 讨论 | 第95页 |
| 5.5 小结 | 第95-97页 |
| 结论 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-105页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及其它成果 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
