| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第8-15页 |
| 1.1 油菜素甾醇信号转导通路概述 | 第8页 |
| 1.2 BRI1的分离和鉴定 | 第8-9页 |
| 1.3 BRI1及其同源基因被确定为BR受体 | 第9页 |
| 1.4 BRI1胞外域是感知BR的结构基础 | 第9-10页 |
| 1.5 BAK1是BRI1的共受体 | 第10-12页 |
| 1.6 BRI1的负调控因子BKI1 | 第12页 |
| 1.7 BRI1受体复合体的去激活过程的研究及问题 | 第12-13页 |
| 1.8 拟南芥磷酸酶概述 | 第13-15页 |
| 1.8.1 PPP家族 | 第13页 |
| 1.8.2 PP2C家族 | 第13-14页 |
| 1.8.3 PTP家族 | 第14页 |
| 1.8.4 Asp-based蛋白磷酸酶家族 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-28页 |
| 2.1 材料 | 第15-20页 |
| 2.1.1 植物材料和培养条件 | 第15页 |
| 2.1.2 菌株 | 第15页 |
| 2.1.3 酶及DNA/蛋白质Marker | 第15-16页 |
| 2.1.4 抗体 | 第16页 |
| 2.1.5 载体 | 第16-17页 |
| 2.1.6 抗生素 | 第17页 |
| 2.1.7 蛋白纯化介质 | 第17-18页 |
| 2.1.8 试剂盒 | 第18页 |
| 2.1.9 主要的化学试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.10 主要的实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.11 图像及数据分析软件 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-28页 |
| 2.2.1 载体的构建 | 第20页 |
| 2.2.2 酵母双杂交实验 | 第20-21页 |
| 2.2.3 融合蛋白体外表达及纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.4 体外pull-down实验 | 第22-23页 |
| 2.2.5 拟南芥的种植和生长 | 第23页 |
| 2.2.6 半体内pull-down实验 | 第23-24页 |
| 2.2.7 插入缺失突变体bipp1 T-DNA插入位置鉴定 | 第24页 |
| 2.2.8 荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测基因RNA转录水平 | 第24页 |
| 2.2.9 Western Blotting分析蛋白表达 | 第24-25页 |
| 2.2.10 农杆菌介导的拟南芥的转化 | 第25页 |
| 2.2.11 植物材料的激素处理 | 第25页 |
| 2.2.12 烟草叶片细胞瞬时转化实验 | 第25-26页 |
| 2.2.13 拟南芥的杂交 | 第26页 |
| 2.2.14 体外去磷酸化反应实验 | 第26-27页 |
| 2.2.15 β-葡糖苷酸酶(GUS)的组织化学鉴定 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-46页 |
| 3.1 酵母双杂交筛选与BRI1相互作用蛋白磷酸酶 | 第28-32页 |
| 3.1.1 诱饵蛋白BRI1载体构建 | 第28-29页 |
| 3.1.2 拟南芥蛋白磷酸酶文库的构建 | 第29-31页 |
| 3.1.3 酵母双杂交筛选与BRI1相互作用的拟南芥蛋白磷酸酶 | 第31-32页 |
| 3.2 多种方法验证BRI1与BIPP1相互作用 | 第32-36页 |
| 3.2.1 酵母双杂交验证相互作用 | 第32-33页 |
| 3.2.2 体外与半体内GST Pull-down实验验证BRI1与BIPP1相互作用 | 第33-35页 |
| 3.2.3 双分子荧光互补实验验证BRI1与BIPP1相互作用 | 第35-36页 |
| 3.3 BIPP1能够在短时间内使BRI1-JKC完全脱磷酸化 | 第36-37页 |
| 3.4 BIPP1基因功能失活导致植株出现变大和下胚轴伸长的遗传表型 | 第37-39页 |
| 3.4.1 bipp1突变体中BIPP1转录和翻译水平检测 | 第37-38页 |
| 3.4.2 bipp1突变体的表型分析 | 第38-39页 |
| 3.5 BIPP1基因功能失活导致BR信号输出放大 | 第39-41页 |
| 3.6 BIPP1对植株BR信号转导的负调控作用依赖于BRI1的激酶活性 | 第41-43页 |
| 3.7 BIPP1的表达受到BR信号的负反馈调节 | 第43-46页 |
| 3.7.1 BL处理导致BIPP1基因RNA水平上调 | 第43-45页 |
| 3.7.2 BL处理导致BIPP1蛋白水平增加 | 第45-46页 |
| 第四章 结论与展望 | 第46-48页 |
| 4.1 结论 | 第46页 |
| 4.2 展望 | 第46-48页 |
| 4.2.1 BIPP1与BRI1的哪个区段相互作用 | 第46页 |
| 4.2.2 BRI1被BIPP1去磷酸化的位点 | 第46-47页 |
| 4.2.3 BR信号对BIPP1的表达及功能的调节作用 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 附录 | 第55-62页 |
| 附录A 常用试剂和缓冲液配方 | 第55-60页 |
| 附录B 常用培养基配方 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-64页 |
