| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 引言与文献综述 | 第8-17页 |
| 1.1 RAC蛋白的局部化激活与细胞迁移相关文献 | 第8-13页 |
| 1.2 本文的主要研究内容和实验设计思路 | 第13-16页 |
| 1.2.1 免疫印迹验证paxillin-GIT1-PIX复合物的存在 | 第13-14页 |
| 1.2.2 用荧光双定位实验通过细胞学方法进一步验证PAXILLIN，GIT1和PIX分子间的相互作用 | 第14-15页 |
| 1.2.3 验证h FN对Rac蛋白的激活 | 第15页 |
| 1.2.4 使用FRET单分子探针验证细胞前沿Paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路对Rac的激活 | 第15-16页 |
| 1.3 该信号通路的研究目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-37页 |
| 2.1 材料 | 第17-23页 |
| 2.1.1 仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.1.2 实验相关的试剂和耗材 | 第18页 |
| 2.1.3 菌种与细胞 | 第18页 |
| 2.1.4 相关试剂的配制与保存 | 第18-22页 |
| 2.1.5 FRET Rac单分子探针 | 第22-23页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第23-37页 |
| 2.2.1 GIT1-EGFP质粒的构建 | 第23-27页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第27-29页 |
| 2.2.3 荧光双定位检测相关蛋白之间的相互作用可发生在细胞前沿 | 第29-30页 |
| 2.2.4 Rac蛋白激活试验 | 第30-35页 |
| 2.2.5 FRET Rac单分子探针的瞬时转染 | 第35页 |
| 2.2.6 激光共聚焦显微镜检测细胞前沿Rac的激活情况 | 第35-36页 |
| 2.2.7 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-42页 |
| 3.1 GIT1-EGFP载体构建结果 | 第37页 |
| 3.2 免疫印迹验证PAXILLIN-GIT1-PIX复合物的存在 | 第37-38页 |
| 3.3 荧光双定位实验通过细胞学方法确认PAXILLIN-GIT1-PIX复合物的存在 | 第38-39页 |
| 3.4 RAC蛋白激活实验验证HFN对RAC蛋白的激活 | 第39-40页 |
| 3.5 激光共聚焦显微镜观察FRET探针结果 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 4.1 实验思路分析 | 第42页 |
| 4.2 实验中的问题 | 第42-44页 |
| 5 结语 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
