| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第13-28页 |
| 1.1 轮状病毒概述 | 第13-17页 |
| 1.1.1 RV的结构 | 第13-15页 |
| 1.1.2 RV的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.3 RV基因组以及病毒蛋白 | 第16-17页 |
| 1.2 轮状病毒与宿主细胞的相互作用 | 第17-23页 |
| 1.2.1 早期相互作用使病毒与细胞结合 | 第18-19页 |
| 1.2.2 RV吸附细胞后需要共同受体 | 第19页 |
| 1.2.3 RV侵入细胞和脱壳机制 | 第19-20页 |
| 1.2.4 RV转录翻译过程中的相互作用 | 第20-22页 |
| 1.2.5 影响RV成熟和释放的宿主因素 | 第22-23页 |
| 1.3 几种与病毒复制有关的细胞蛋白 | 第23-27页 |
| 1.3.1 肌动蛋白 | 第23-25页 |
| 1.3.2 原肌球蛋白 | 第25-26页 |
| 1.3.3 核糖体蛋白 | 第26-27页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 毒株和细胞 | 第28页 |
| 2.1.2 质粒和菌株 | 第28页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-41页 |
| 2.2.1 原核表达GST-VP6重组蛋白 | 第30-35页 |
| 2.2.2 发现并鉴定与PoRV VP6相互作用的细胞蛋白 | 第35-36页 |
| 2.2.3 与PoRV VP6相互作用蛋白的功能研究 | 第36-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-63页 |
| 3.1 GST-VP6重组蛋白的表达及纯化 | 第41-43页 |
| 3.1.1 p GEX-PoRV-VP6重组质粒的构建 | 第41页 |
| 3.1.2 GST-VP6重组蛋白的原核表达 | 第41-43页 |
| 3.1.3 GST-VP6重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| 3.2 发现并鉴定与PoRV VP6相互作用的细胞蛋白 | 第43-50页 |
| 3.2.1 GST pull-down调取PoRV VP6相互作用蛋白 | 第43-48页 |
| 3.2.2 Co-IP验证PoRV VP6相互作用蛋白 | 第48-50页 |
| 3.3 PoRV VP6蛋白与细胞?-肌动蛋白相互作用的功能研究 | 第50-63页 |
| 3.3.1 荧光定量q RT-PCR确定PoRV感染一轮复制周期 | 第50-51页 |
| 3.3.2 Western blot检测病毒复制过程中PoRV VP6蛋白表达变化 | 第51页 |
| 3.3.3 Cyto D药物处理对PoRV增殖的影响 | 第51-53页 |
| 3.3.4 双免疫荧光实验观察β-肌动蛋白与PoRV VP6蛋白共定位 | 第53-54页 |
| 3.3.5 免疫电镜观察PoRV VP6蛋白在感染细胞内的分布 | 第54页 |
| 3.3.6 F-actin结合试验研究PoRV VP6蛋白对肌动蛋白聚合的影响 | 第54-58页 |
| 3.3.7 si RNA干扰降低?-肌动蛋白表达影响PoRV复制 | 第58-63页 |
| 4 讨论 | 第63-68页 |
| 4.1 PoRV VP6蛋白与?-肌动蛋白的相互作用 | 第64-65页 |
| 4.2 PoRV VP6蛋白与原肌球蛋白的相互作用 | 第65-66页 |
| 4.3 PoRV VP6蛋白与 40S核糖体蛋白S16的相互作用 | 第66-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 6 创新点 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第81页 |
